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        细胞系的 DNA STR 谱

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        细胞系的DNA STA谱分析可以用于:通过与基础图谱进行比对,即可对每一批新细胞系的种类进行确认。

        来源:丁香实验

        操作方法

        细胞团抽提

        一、开始实验前,必须准备以下试剂: (a)蛋白酶溶剂溶解:向 Qiagen® 冷冻干燥的蛋白酶中加适量蛋白酶溶剂。该溶液 2~8°C 保存 2 个月内稳定。 (b)AW 1 和 AW 2 缓冲液:向装有 AW 1 和 AW 2 浓缩液的瓶子中加人适量无水乙醇。AW 1 和 AW 2 缓冲液室温下一年内稳定。 (c)AL 缓冲液:用前颠倒充分混匀。 二、操作步骤 (试剂盒生产商的操作步骤,

        用SGM Plus®进行扩增

        1. 参照 ABI 的操作步骤,为待扩增样品准备足量的混合物,每个样品管包含: (a) AMPF/STR®PCR 反应混合物 21 μl (b) AMPF/STR®SGM Plus®引物一套 11 μl (c) Amplitaq gold®DNA 聚合酶 1μl 2. 从每个样品管吸出 30 μl 混合物,或加到单个大 PCR 管中,或加到薄壁微滴定板中,用黏性薄片封板。 3. 从冰箱取

        利用ABI377DNA测序仪进行凝胶电泳

        1. 在烧杯中混合以下各成分,制备 4 % 聚丙烯酰胺凝胶(制胶材料:量筒、天平、过滤器(如 Sartolab 150 ml 滤器),真空泵、梳子、0.2 mm 胶隔板、磁力搅拌器、尿素(如 Fisher)、丙烯酰胺贮存液(如Bio-Rad 40 % 丙烯酰胺/BIS 19:1)、无菌纯水(如 Fisher AR 级水)、混合床基树脂(如 Sigma)、过硫酸铵(如 Sigma)、10× TBE

        细胞系结果分析

        本节包括 2 个主要领域:分析利用GeneScan®分析软件中 DNA 程序收集软件收集到的原始数据,和利用Genotype®软件为前面用GeneScan®软件分析过的 DNA 谱中的指定等位基因名称。 1. 打开凝胶图像,调节对比度,确保所有的颜色都能看清。 2. 设定分析范围在 75 bp 和 450 bp 内定尺寸标准峰值中。 3. 再作一张凝胶图像。 4. 用凝胶自动分道器进行分道

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