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        植物缺水程度的测定实验

        相关实验:植物缺水程度的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物体内的水分情况,因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

        用人造沸石(Permutit)在pH1-7范围内振荡溶液可除去干扰的氨基酸或使其不与茚三酮反应(如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯柄氨酸、精氨酸等),脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应,其含量与颜色的深浅呈正相关,可用分光度计测定。该法有专一性。

        材料与仪器

        步骤

        二、仪器药品

        (1)721分光光度计;(2)水浴锅;(3)离心机;(4)移液管;(5)烧杯;(6)容量瓶;(7)研钵;(8)冰醋酸;(9)具塞试管;(10)脯氨酸;(11)80%乙醇;(12)茚三酮试剂:将2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸中,加热(70℃)溶解,试剂至少在24小时内稳定。

        三、实验步骤

        1. 绘制标准曲线

        取脯氨酸溶于80%乙醇中,然后稀释成下列浓度:0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分别取标准溶液2ml,冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml加入试管中,用橡皮塞塞紧,于沸水浴中加热15分钟。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定,以浓度0为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标,以光密度为纵坐标作标准曲线。

        2. 植株样品液的提取

        选取植株功能叶片2g,用3ml 80%乙醇研磨(放少许石英砂),成浆状,用80%乙醇洗研钵,将提取物和洗液置于试管中,80%乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24小时或水浴。

        将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤,重复过滤一次,除去色素和残渣。将提取液置于试管中,加其重1/5的人造沸石强烈振荡5分钟。将上层液在离心机上离心10分钟,取上清液备用。

        3. 样品溶液的测定

        将离心后所得上清液,取2ml置于试管中,再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮试剂,加盖密封,在沸水浴上加热15分钟。用3ml 80%乙醇代替样品液作对照。在分光光度计上用515nm进行比色测定。读出光密度后,从坐标曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。

        4. 结果计算:

        来源:丁香实验

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