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        实验82 植物缺水程度的鉴定(脯氨酸法)

        互联网

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        实验82 植物缺水程度的鉴定(脯氨酸法)

         

        原理

         

          当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株体内的水分情况,因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

          用人造沸石(Permutit)在pH1─7范围内振荡溶掖,可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应(如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等),脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应,其含量与色度成正相关,可用分光光度计测定。此法有专一性。

         

        仪器药品

         

          721型分光光度计    离心机

          水浴锅        烧杯

          移液管        研钵

          容量瓶        具塞试管

          冰醋酸        80%乙醇

          脯氨酸        人造沸石

          茚三酮试剂:将2.50g茚三酮于60ml冰醋酸和40ml 6mol/L磷酸中,加热(70℃)溶解。试剂至少在24小时内稳定。

         

        操作步骤

         

          1.绘制标准曲线

          取脯氨酸溶于80%乙醇中,然后稀释成下列浓度:0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg/ml。分别取标准溶液2ml,冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml加入试管中,用橡皮塞塞紧,于沸水浴中加热15分钟。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定,以浓度0为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标作标准曲线。

          2.植株样品液的提取

          选取植株功能叶片2g,用3ml80%乙醇研磨(放少许石英砂)成浆状。用80%乙醇洗研钵,将提取物和洗液置于试管中。80%乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24小时。

          将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤,重复过滤一次,除去色素和残渣。将提取液置于试管中,加其重量1/5的人造沸石强烈振荡5分钟。将上层液在离心机上离心10分钟,取上清液备用。

          3.样品溶液之测定

          将离心后所得之上层液,取2ml置于试管中,再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮试剂,加盖密封,在沸水浴上加热15分钟。用3ml80%乙醇代替样品液作为对照。在分光光度计上用515nm进行比色测定。读出吸光度后,从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。

         

         

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