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        显G带法

        最新修订时间:

        原理

        常用的显带方法,有操作简便、经济和能长期保存的优点,有关G带显示法在文献中报道极多,但不一定都能重复出满意的效果,可能与各研究室所用材料条件有关,因此引进任何一显带法之前,还要进行预试验。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        一、胰酶-Giemsa 混合显带法

        1.  预处理

        最中期染色体标本,置60 ℃~80 ℃温箱中20~30 分钟,或在37 ℃温箱过夜;然后浸入0.025 M磷酸缓冲液中,pH6.8,56 ℃温浴10 分钟(不经此步亦可);

        2.  消化和染色

        用现配的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10~30 分钟,混合液按如下比例配制

         
        0.025 M 磷酸缓冲液pH6.8 73.0 ml
         
        甲醇 27.0 ml
         
        Giemsa干粉 50.0 mg

        0.25%胰酶 0.3~0.4 ml

        3.  封片

        染色后用自来水冲洗(流水冲洗标本背面),入蒸馏水漂洗数次、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树脂中。

        二、Giemsa 显带法


        1.  预处理

        将标本置入60~80 ℃温箱或烤箱中20~30 分钟;亦可在37 ℃温箱中
        过夜;

        2.  胰酶消化

        用0.85 %的NaCl配制0.25 %胰蛋白酶溶液(微孔滤膜无菌滤过)
        消化3~5 分钟(用滴加在标本上或用染色缸消化均可);

        3.  染色

        取出标本片,先直立于吸水纸上除去多余胰酶液后,随即置入Giemsa
        染液中,染10 分钟;

        4.  封片

        自来水洗、蒸馏水漂洗、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树胶中。

        注意事项

        1.  胰酶消化显带过程中,胰酶消化是重要的环节,消化不足带不出现,消化过度,染色体变得膨胀和不着色,必须把握好胰酶浓度和消化持续时间。

        2.  预处理或老化是
        显带过程中另一个重要环节,对消化和染色有很大影响,其中干热处理是较简便易行和效果好的办法。

        来源:丁香实验

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