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        染色体G显带法实验

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        一、实验目的
        初步了解什么是染色体带型,掌握染色体G显带方法。
        二、实验原理
        染色体的分带是70 年代发展起来的技术,其中使用最广泛的是G带。显示G 带的方法很多,最常用的是将已制成染色体标本的玻片进行预处理,然后进行Giemsa染色。预处理的方法很多,如用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等,其中最常用的是用胰蛋白酶进行预处理,方法简便,周期短。
        G带区在DNA较丰富的A-T 对,在间期核呈固缩状态,而且是DNA晚复制区之一。有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区,Giemsa染料在G带区是与DNA结合,而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。G带区位于染色体的两臂上,和Q带区相对应,而与R带区相反。
        获得优良的G带需要反复的实践,干净的制片,丰富而又清楚的分裂相,固定的实验条件和足够的经验是十分重要的。
        三、实验材料
        小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留下的标本片。
        四、实验器具和药品 试剂
        显微镜、冰箱、恒温箱、 水浴 锅、立式染缸、镊子、切片架、切片盒、烧杯、量筒、吸管。
        胰蛋白酶(Diffco,1:250)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、氯化钠、PH6.8磷酸缓冲液 、Giemsa 原液、2×SSC溶液。
        五、 实验方法和步骤
        G带的方法很多,现介绍3种方法,但无论那种方法,片龄以不超过5天为宜。
        (一)胰蛋白酶-EDTA法
        1.0.1%胰蛋白酶和0.02%EDTA按1:1混合于立式染缸中,并调至PH6.8,暂置冰箱中备用。
        2. 将在37℃温箱中预处理3个小时的标本片分别浸入胰蛋白酶和EDTA混合液中,轻轻摇动30~75秒钟。
        3. 将处理过的标本在磷酸缓冲液中漂洗数秒。
        4. 立即用1:10 Giemsa染液染色20~40 分钟。
        5. 流水冲洗,空气干燥后镜检。
        (二)胰蛋白酶消化法
        1.37℃烤片2~3小时。
        2.将制片放入37℃预热或15℃预冷的0.25%的胰蛋白酶溶液中5~30秒。
        3.0.85%NaCl溶液冲洗两次,凉干后染色。
        (三)ASG(Acetic-saline-Giemsa)法
        1.用甲醇、冰醋酸固定液固定,空气干燥法制片的标本。
        2.浸入2×SSC溶液中,60℃温育1小时。
        3. 蒸馏 水冲洗。
        4.1/20 Giemsa 染液染色1 小时。
        5.水洗后凉干镜检。
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