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        抗管蛋白免疫染色法

        相关实验:细胞骨架观察实验

        最新修订时间:

        原理

        细胞骨架微管的主要成分主要为管蛋白(Tublin),用免疫荧光法能显出其清晰结构。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  细胞培养

        用支持物细胞培养法,把细胞培养在小盖片上;

        2.  漂洗

        用镊子挟出小盖片,在温PBS中漂洗3 次,每次30 秒;

        3.  固定

        在室温中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分钟;

        4.  漂洗

        从固定液中取出,仍用温PBS漂洗3 次,每次1 分钟,最后在滤纸上吸
        干多余的PBS;

        5.  过丙酮

        投入冷丙酮中(-10 ℃~-20 ℃),令细胞面向上,作用7 分钟;

        6.  漂洗:

        同4;

        7.  抗体处理

        取一直径6 厘米干净的碟皿,向皿中央滴1 滴浓度为0.1~0.2 mg/ml
        的一级抗管蛋白抗体,令小盖片细胞面向下扣在抗体液上,覆以皿盖,置37 ℃温箱中45 分至1 小时(内有水盒以避免抗体液蒸发干掉);

        8.  漂洗

        向碟皿内徐徐滴加PBS,令盖片浮起在液面,用镊子挟出,按4处理;

        9.  二级荧光抗体处理

        按7进行(荧光抗体常用羊抗兔抗体);

        10.  漂洗

        按8和4处理,封片;取一大载物片,用滤纸剪一纸框置于载物片上
        向纸框中滴甘油/PBS(pH8.5,PBS 1 分加甘油9 分)少许,把小盖片置入框中再覆以大盖片;置荧光显微镜下观察。

        注意事项

        荧光抗体有市售品,如无,也可参阅免疫学技术自制。

        来源:丁香实验

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