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        考马斯亮蓝染色法

        相关实验:细胞骨架观察实验

        最新修订时间:

        原理

        荧光免疫染色法显示细胞骨架具有清晰优点,但操作过程较复杂;考马斯亮蓝染色法简便易行,清晰度稍差,但如分化处理适当能提高清晰度。

        材料与仪器

        步骤

        1.  固定液准备

        0.1 M 磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O) 14.0 ml

        0.1 M 磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 36.0 ml

        蒸馏水 50.9 ml

        (以上各液相混合后再加戊二醛)

        25 %戊二醛 50.0 ml

        染色液:

        甲醇 46.5 ml

        冰醋酸 7.0 ml

        蒸溜水 46.5 ml

        (以上各液相混合后再加染)

        考马斯亮蓝 0.2g

        2.  培养细胞

        用支持物盖片培养法;

        3.  固定

        从培养瓶中取出细胞盖片,投入固定剂中固定15 分钟;

        4.  漂洗

        取出盖片先置蒸馏水中漂洗2 分钟,再用蒸馏水洗两次,每次1 分钟;

        5.  染色

        在考马斯亮蓝液中染色60 分钟;

        6.  按4程序漂洗;

        7.  分化

        置入含甲醇冰醋酸液碟皿中(不含染料),在倒置显微镜直接窥视下,见
        细胞质内微丝逐渐明显,背地清亮时便终止;

        8.  漂洗

        按4处理;

        9.  脱水→各度酒精→二甲苯;

        10.  封片

        用树胶封固;

        11.  结果

        细胞内微丝呈蓝色,如分化较好时背地清亮,反之会影响微丝的清晰度。

        来源:丁香实验

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