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        骨骼肌细胞培养实验

        相关实验:肌组织细胞培养实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠(Wistar 大鼠更好)。

        1.  杀死动物,无菌取大腿肌组织,切成0.3~0.5 厘米小块;

        2.  用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消化,无菌纱网或纱布滤过,合成培养基加10 %小牛(或马)血清培养,为促进分分蘖节经可加1 %的胎汁;

        3.  细胞接各量为2×106 /皿;接种在胶原或明胶的底物上能促进细胞分化。明胶制备比较简单,常用Hanks液配的0.01 %明胶。

        细胞接种率约为50 %;细胞生长开始呈纺锤形,培养50~52 小时后将出现融合形成肌细胞状多核纤维。数日后融合停止,此时能观察到横纹。一般在融合后二三天内能见到收缩现象;因收缩运动有时可导致细胞从底物脱离。在初代培养时,如发现成肌细胞(Myoblast)所占比例很少时,根据成肌细胞比非成肌细胞贴壁慢的特点,可采用胰蛋白酶消化后反复贴壁法,淘汰掉非肌细胞成分。骨骼肌细胞可进行传代培养,使之成为有限细胞系;但易失去分化现象;表现为成肌细胞不发生融合,从而不能形成多核肌纤维和出现收缩现象,只有培养条件良好时,才可发生肌细胞收缩变化。

        来源:丁香实验

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