• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        基本方案

        相关实验:昆虫细胞转染实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  接种2x106个Sf9细胞于60 mm 培养皿,在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养,于27℃培养30~60 min,让细胞贴壁。

        2.  相应于毎一待转染的培养皿,吸取40 ul 无菌水,加入一支无菌聚苯乙烯管中,加入5 ul 线性化的AcMNPV DNA和5 ul  100 ng/ul 的质粒DNA。将Lipofectin 充分混匀后,往DNA溶液中加入50 ul,轻柔混匀,于室温温育15 min。

        3.  在15 min 的温育期间,用1.5 ml 不含胎牛血清的完全培养液代替培养皿中的培奍液。

        4.  往培养皿中遂滴加入Lipofectin-DNA复合物,同时轻柔旋转平皿加以混匀。于27℃温育4~5 h。
         
        5.  往每个培养皿中加入1.5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液(或含有5%胎牛血清的无血清培养液),在27℃加湿培养箱中温育60~72 h。
         
        6.  从每个堉养皿中将转染上清(由培养液和病毒组成)转移至无菌的15 ml 锥形离心管中4℃ 1 000 g 离心10 min。将病毒上清转移至新的灭菌试管,4℃避光保存备用。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序