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- 使用表达目的基因的杆状病毒感染高密度昆虫细胞，是一种通用且强大的真核生物重组蛋白表达系统。
- 广州
- 2026年01月01日
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云舟生物科技（广州）股份有限公司
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定制服务
使用表达目的基因的杆状病毒感染高密度昆虫细胞，是一种通用且强大的真核生物重组蛋白表达系统。昆虫表达系统保留了大多数真核翻译后修饰和蛋白质折叠的特性，因此是生产激酶和类固醇受体的首-选方法。当这些蛋白在细菌细胞中生产时，由于缺少适当的磷酸化或折叠，可能会导致其失去活性。
亮点
- 保留关键的真核生物蛋白修饰
- 多种昆虫细胞系可选
- 适用于分子量较大的蛋白生产
- 适用于分泌型蛋白、胞内蛋白以及膜蛋白的生产
价格与周期
运输与存储
我们的载体默认以E. coli甘油菌形式交付。根据需求，我们也可以交付质粒DNA，并收取一定的额外费用。我们大部分重组蛋白以冻结的液体形式交付，并以干冰形式运输。接收到重组蛋白后，请将其存储于-20°C到-80°C的无菌容器。存储妥当的重组蛋白通常可稳定保存一年。同时，我们建议对接收到的重组蛋白进行分装以避免反复冻融。
质量控制
云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制（QC）。对于大多数系统，默认的质量控制包括：（1）酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体；（2）通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。
技术详情
载体系统
为了在昆虫系统中表达重组蛋白，首先需要将目的基因（GOI）克隆到云舟生物的由强启动子控制的pBV载体中。该载体的表达盒两侧由Tn7转座子末端元件Tn7L和Tn7R包围。包含目的基因的载体随后被转化到携带杆粒穿梭载体和辅助质粒的大肠杆菌中。杆粒本质上是一种非常大的质粒，经过修饰整合了一个编码区插入有attTn7位点的lacZ基因。辅助质粒表达Tn7转座酶。而转座酶将介导pBV载体上由Tn7R和Tn7L包围的区域（包含目的基因的表达盒和抗性基因）转移到杆状病毒的attTn7位点。因此，可以通过药筛和蓝白筛选（lacZ的表达致使非重组菌落呈蓝色，而由于转座子插入破坏了lacZ表达，重组菌落则呈白色）来识别含有重组杆粒的菌落克隆。然后可以使用纯化的杆状病毒DNA转导昆虫细胞以产生活杆状病毒（P1）。然后将P1杆状病毒在昆虫细胞中扩增以达到合适的滴度。这些病毒可用于继续感染昆虫细胞以生产目的重组蛋白。
案例研究
图2 利用昆虫杆状病毒系统生产的重组蛋白。（A）SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量，纯度≥95%。（B）通过SEC-HPLC测定纯度为≥95%。（C）通过细胞生长试验测定重组蛋白的生物活性。ED50介于2和11 ng/ml之间。
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文献和实验先来看下传统重组蛋白表达系统： 传统重组蛋白表达系统应对的挑战： 操作流程长：5天-4周时间 很多蛋白不能在细胞内成功表达 不可以改造目标蛋白 以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统，具有表达量高和成本低的优点，但是蛋白质翻译后缺乏加工机制（比如形成二硫键和蛋白糖基化等），且很难保留生物活性。 以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近真核生物等优点，但是部分蛋白产品易降解，表达量不可控。 哺乳动物细胞和昆虫
QIAgene Expression Kit——再也不为重组蛋白的表达效率发愁 据Protein Database的最新数据表明，目前已知的人类蛋白有35,000种(包括splice variants)，大约33%的蛋白正处于研究中，但是只有8%的蛋白能够成功表达。统计数据同时显示，目前克隆，表达，纯化的成功率只维持在54%，74%，59%。所以说，在蛋白表达的漫漫征途中，拿不到想要的蛋白是一件非常普遍的事情。举一个例子来说对于目标蛋白不表达或表达量低这个常见问题，需要排除或检查的因素就太多
Gateway技术提供以下可能： 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间 同时将您的基因转移到多个表达系统 在任何您选择的系统――体外，细菌，酵母，昆虫，或哺乳动物――分析表达 一、一种更好的克隆方法 Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统（图1）。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤，而同时典型的克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时，还可以保证正确的方向和阅读框。Gateway也有助于进行带不同数目
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