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        辅助方案(细胞核提取方法的优化)

        相关实验:核提取物的制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  按基本方案中歩骤1~7操作。
         
        2.  将细胞核悬液分成5等份。在冷室内不断搅拌,按如下方法在每份悬液中加入1/3体积髙盐缓冲液,在第1份中加浓度最低(0.8 mol/l)的高盐缓冲液,其余各份中依次加入KCl浓度逐渐增髙(直到1.6 mol/l)的高盐缓冲液。轻轻混合30 min。

        3.  25 000 g 离心30 min。将上清进行透析(见基本方案步骤10),直到加浓度最髙的那份核悬液的电导达到与透析液一致(100 mmol/l KCl)。各份提取物25 000 g 离心20 min。
         
        4.  检测各份提取物的电导并测定蛋白质浓度(见基本方案步骤12)。用预定的方法分析提取物以确定最佳提取条件。

        来源:丁香实验

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