• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        荧光辅助糖电泳的优化

        互联网

        4663

        摘要:

        荧光辅助糖电泳(FACE)是一种快捷、花费少的分离糖类方法。寡糖首先经8-氨基萘-1,3,6-三磺酸(ANTS)胺化还原衍生,该反应过程在所给实验条件下需要16h。然后,经ANTS衍生的寡糖在ρ(丙烯酰胺)=0.32g/ml ρ(双丙烯酰胺)=0.024g/ml组成的碱性分离胶上电泳从而得以分离。该方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

        寡糖有许多重要的生理功能,它在发育、免疫和癌转移等过程中起着很重要的作用。而糖蛋白能参与细胞的稳定和粘合、抗体的识别以及微生物的束缚等生理过程,并且在细胞表面识别方面有重要的作用。

        寡糖混合物的分离和性质研究是糖类研究中的难点之一,其主要原因有:(1)糖分子缺乏生色基团或荧光基团,直接检测困难;(2)寡糖具有类似的化学组成,有多种可能的异构体,存在不同种连接方式和分支形式,结构异常复杂,分离难度很大。

        虽然高灵敏度的气相色谱、液相色谱、质谱、核磁共振谱和毛细管电泳在糖类分析中已显示出优越性,但是上述糖类分析方法需要专门的仪器和操作熟练的技术人员。

        荧光辅助糖电泳(fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis,FACE),也称为荧光标记糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylami-de gel electrophoresis of fluorophore-labeled saccharides,PAGEFS),是一种简单、快捷的糖类分析方法,它无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

        使用FACE分析糖类时,首先需要将糖预衍生。目前,有若干种已应用的衍生方法和相应的衍生试剂,其中8-氨基萘基-1,3,6-三磺酸(8-aminonaphthalene-1,3,6-trisuffonate,ANTS)应用较多。

        ANTS衍生不仅为糖分子提供了生色(荧光)基团,还提供了3个负电荷,使原来中性的糖分子在各种pH的缓冲液中在电场力作用下产生电迁移,因此较适用于寡糖的分离。然后将衍生后的糖类进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)。

        相对于蛋白质和DNA这些大分子而言,寡糖算是较小的分子。因此,必须使用较高浓度的凝胶,才能有效地分离寡糖。

        本文报道了FACE分离寡糖的最佳方案,为寡糖的分离和分析提供了实验依据。


        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序