离子交换层析实验

1. 配制离子交换层析缓冲液，安装好层析柱，但以离子交换层析缓冲液取代其中的凝胶过滤缓冲液。 图一、用于蛋白质离子交换层析的梯度混合仪器 2. 用起始梯度的缓冲液溶解含蛋白质混合物的样品。 3. 弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。 4. 让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼

1. 离子交换凝胶的选择依据： （1）根据蛋白质的pH只稳定范围。蛋白质在等电点pI以上pH稳定时选择阴离子交换凝胶介质，在pI以下pH的稳定时，则选用阳离子交换凝胶介质。 （2）根据特分离蛋白质的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白，选用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose样凝胶；更大的分子，用Sephadex A-25或C-25。

一、IEX 分离将 IEX 介质填充到柱中以形成填充床，然后用填充基质孔隙和颗粒之间空间的缓冲液平衡床。 二、平衡1、将固定相平衡到所需的起始条件：当达到平衡时，所有固定相带电基团都与可交换的反离子（例如Na+ 或 Cl-）结合。2、选择起始缓冲液的 pH 值和离子强度，以确保在上样时，介质与目标蛋白质结合，尽量避免与杂质结合。 三、上样和清洗1、结合目标分子：样品缓冲液应具有与起始缓冲液相同的