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        蛋白质染色实验

        实验分类:

        蛋白质实验

        最新修订时间:

        简介

        蛋白质染色可用于(1)蛋白质的观测(2)蛋白质含量的测定。

        来源:丁香实验

        操作方法

        考马斯亮蓝染色

        1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢揺动2 h。 2. 倾去固定液,以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶,并缓慢摇动4 h。 3. 倾去染色液,用约50 ml 固定液冲洗凝胶。 4. 倾去固定液,以脱色液覆盖凝胶,缓慢摇动2 h,倾去脱色液,再加入新脱色液同时至获得蓝色条带及干净的背景。凝胶可放置在乙酸或水中保存。 5. 需要时,

        银染法

        1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2. 倾去固定液,加5倍凝胶体积的脱色液,缓慢摇动60 min 以上。 3. 倾去脱色液,加5倍凝胶体积的10%戊二醛,在通风橱中缓慢摇动30 min。 4. 倾去戊二醛溶液,用水洗凝胶4次以上,每次30 min 以上,最后一次洗涤以过夜为佳。缓慢摇动。

        非氨盐银染法

        1. 将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中,加入100 ml 固定液,在旋转摇床中缓慢摇动30 min。 2. 倾去固定液,将凝胶浸没在脱色液中,缓慢摇动30 min。 3. 倾去脱色液,加50 ml 10%戊二醛,在通风橱中缓慢摇动10 min。 4. 倾去戊二醛,用水彻底洗凝胶2 h,期间换水几次以保证获得低本底水平。 5. 倾去水,以100 ml ug/ml 的DTT浸泡凝胶30 min。

        快速银染法

        1. 将凝胶置于塑料容器中,加入50 ml 甲醛固定液,在旋转摇床中缓慢摇动10 min。 2. 倾去固定液,用水冼两次,每次5 min,缓慢摇动。 3. 倾去水,凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 min,缓慢摇动。 4. 倾去硫代硫酸钠溶液,用水洗凝胶两次,毎次20 s。 5. 倾去水,将凝胶浸泡在50 ml 硝酸银中10 min。缓慢摇动

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