• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        高效率电转化法

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  接种一个单菌落于5 ml LB培养液,37℃温和振摇培养5 h 或过夜。

        2.   将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中,37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。
         
        3.  细菌在冰水浴冷却10~15 min,然后转移到预冷的1升离心瓶中。于2℃,5 000 g 离心20 min 沉淀用5 ml 预冷的水溶解6。

        4.  加入500 ml 冰冷的水,混匀,按步骤3重复离心1次,立即将上清倒掉,用残余的液体重悬细胞。
         
        5.  新鲜制得的细菌

        (1)将悬浮液加入到预冷的50 ml 聚丙烯管中,2℃,5 000 g 离心10 min。

        (2)估计细胞沉淀的体积,沉淀用等体积的冰冷水重悬。

        (3)按50~300 ul 分装于预冷的微量离心管中。

        6.  冻存细菌

        (1)加入40 ml 冰冷的10%甘油,混合,然后按照步骤5离心。

        (2)估计沉淀的体积,然后加入等体积的冰冷的10%甘油,重悬菌体。

        (3)按50~300 ul 分装于预冷的微量离心管中。

        (4)于干冰上冷冻并贮存于-80℃。

        7.  将电转化仪调到2.5 kV、 25 uF ,脉冲控制器调到200~400Ω;。

        8.  将1 ul 质粒DNA加入到盛有新鲜制备的细菌或融化的冻存细菌的小管中,混匀。
         
        9.  将转化混合物转移到预冷的电转化池中,吸干池的外表面,然后放入样品槽中。
         
        10.  进行脉冲电转化,然后取出电转化池,马上加入1 ml SOC培养液,并且用巴斯德吸管转移到无菌的培养管中。

        11.  于37℃,中速振荡培养30~60 min。

        12.  分小份涂布于含有抗生素的LB平板上。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序