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        PCR清洁试剂盒纯化法

        相关实验:DNA 纯化实验

        最新修订时间:

        原理

        硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。
         

        材料与仪器

        步骤

        一、试剂盒组成、贮存、稳定性
         
        1.  说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
         
        2.  Buffer PCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
         
        3.  Buffer W2 concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。
         
        4.  Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室温密闭贮存。
         
        二、操作步骤
         
        用户可以选择负压法或离心法。
         
        A. 负压法
         
        1A.  正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 ul,加至100 ul);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。
         
        2A.  加0.3 ml Buffer W2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤两次。
         
        ~undefined 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
         
        3A.  保持负压将96孔DNA制备板抽吸10 min。
         
        4A.  导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。
         
        5A.  将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30 ul 水或Eluent,室温静置1 min。3 000xg离心5 min洗脱DNA。
         
        B. 离心法
         
        1B.  在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 ul,加至100 ul);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6 ml深孔板中,1 000xg离心1 min,弃滤液。
         
        2B.  在96孔DNA制备板中,加0.3 ml Buffer W2,1 000xg离心1 min,弃滤液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤一次。
         
        ~undefined 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
         
        3B.  将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,3 000xg离心10 min。
         
        4B.  将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30 ul水或Eluent,室温静置1 min。3 000xg离心5 min洗脱DNA。

        注意事项

        1.  将洗脱液或水加热至65℃,有利于提高洗脱效率。
         
        2.  DNA分子呈酸性,建议在2.5 mM Tris-HCl,pH8.5洗脱液中保存。

        来源:丁香实验

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