• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        Caspase-3活性的检测

        相关实验:细胞凋亡中 Caspase-3 活性的检测

        最新修订时间:

        原理

        Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞,caspase-3的活性明显下降。

        材料与仪器

        步骤

        1、收集细胞;


        2、PBS洗涤;


        3、抽提细胞裂解液;


        4、蛋白定量;


        5、SDS-PAGE电泳,硝酸纤维素膜或PVDF膜转移,5%脱脂奶粉封闭,室温1.5——2h或4°C过夜;


        6、Caspase-3多抗或单抗室温反应1——2h或4℃过夜,TBS-T(含0.05% Tween 20的TBS)洗3次,5——10min/次;


        7、HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1——2h→ TBS-T洗3次, 5——10min/次;


        8、ECL显影或NBT/BCIP显色。

        注意事项

        1. 整个操作动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞;


        2.反应完毕后尽快在一小时内检测。

        常见问题

        1. 结果采用Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及对底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]等的裂解。


        2. 此外还有荧光分光光度计和流式细胞术分析法。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序