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文献和实验7)和夹子 (2)1升的烧杯 (3)1 X PBS (4)100mM PMSF (5)7ml浓缩后的折叠复合物 2. 试剂:生物素化缓冲液: 100mM Tris(PH7.5) 200mM NaCl 5mM MgCl 【操作步骤】 (1)将1升生物素化缓冲液加入1升的烧杯中,并放一个磁力搅拌棒于其中。冷却至4℃。
含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。 100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制) 2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。 100×
剂,还原剂,表面活性剂等等的组合。经典的包涵体溶解液的配方为:pH8.0,20mM Tris,8M Urea。说它经典,是因为我用的最多,嘻嘻。再根据个性蛋白纯化的需要往这个配方里面加调料,如Ni柱纯化的咪唑、氯化钠;溶解或吸附不好时再加点DTT、Triton。 包涵体的溶解也有两个小Trick,独门秘籍哦。第一,包涵体沉淀在溶解时往往会有一些像硬胶状的块块,有弹性,很难溶。你可以在加变性剂之前,加一点buffer进去,用玻璃棒或硬塑料棒搅成面糊糊,尽量不要有大块块。然后再加变性剂磁力搅拌溶解
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