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        ELISPOT实验

        相关实验:ELISPOT

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. PBS 溶解抗原为30 μg/ml,加100 μl/孔于PVDF 膜铺底的96 孔灭菌板过夜;
         
        2. 第二天吸去包被液后,加5%FCS 的PRMI 1640 培养基100 μl 封闭1 小时,37℃;
         
        3. 准备脾细胞悬液(用氯化铵去除红细胞,制备成单个脾淋巴细胞悬液);
         
        4. 从1 × 106/孔开始,按1:3 的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度,并做3 个复孔,37 ℃静置培养5 小时;
         
        5. PBS 洗3~5 次,生物素化的抗鼠IgG 二抗孵育30 min;
         
        6. PBS 洗3~5 次,链亲和素标记的碱性磷酸酶孵育30 min;
         
        7. PBS 洗3~5 次,用底物BCIP/NBT 显色,显微镜下观察显色反应,显色后及时终止反应;
         
        8. 计数每孔中的斑点数目,计算每106 个脾细胞中抗体分泌细胞数量。

        来源:丁香实验

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