牙髓干细胞的分离培养

(a)用PBSA洗三遍，充分清洁牙齿表面。(b)用消毒液消毒，然后再用PBSA充分清洗。(c〕用连接牙科钻的牙科碳化转头，沿骨质和釉质的结合处切开牙齿，然后暴露髓腔。间歇地将牙齿在用冰预冷的PBSA.中浸泡避免切割过程中过热。在SHED分离时，有时由于牙根吸收牙髓已经暴露了，就不需要进杆这个步骤。(d)用小号精细镊或牙挖器，轻轻从牙髓腔中分离牙髓组织。(e)将牙髓组织放人培养皿中的少量MSC培养液

(a)用手术刀片将牙髓组织切成小碎片。(b)将剪碎的组织放入胶原酶/中性蛋白酶混合溶液中（1:1)。(c)37℃孵育30〜60min，间歇地摇匀组织/消化酶混合物。(d)消化后，加人足够的MSC培养基，终止酶的活性。(e)将悬液经70μm细胞滤膜过滤，去除细胞碎片，得到单细胞悬液。(f)500g离心6min。(g)倒掉上清液，用MSC培养基重悬细胞。然后进行免疫磁珠分选:和能与DPSC细胞反应的一

(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。(c)在80%的贴壁细胞从培养表面脱离时，加入MSC培养基。(d)500g离心6min。(e)倒掉上清，用MSC培养基重悬细胞。(f)细胞计数，按需要的细胞密度接种。(g)在MSC培养基，37℃和5%CO2的培养箱中培养。