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        牙髓干细胞DPSCs/乳牙干细胞SHED的原代培养

        相关实验:牙髓干细胞的分离培养

        最新修订时间:

        原理



        材料与仪器

        步骤

        (a)用手术刀片将牙髓组织切成小碎片。


        (b)将剪碎的组织放入胶原酶/中性蛋白酶混合溶液中(1:1)。


        (c)37℃孵育30〜60min,间歇地摇匀组织/消化酶混合物。


        (d)消化后,加人足够的MSC培养基,终止酶的活性。


        (e)将悬液经70μm细胞滤膜过滤,去除细胞碎片,得到单细胞悬液。


        (f)500g离心6min。


        (g)倒掉上清液,用MSC培养基重悬细胞。然后进行免疫磁珠分选:和能与DPSC细胞反应的一抗孵育,包括STRO-I(小鼠抗人MSC;IgM),CC9(小鼠抗人CD146/MUC-18;IgG2a),或3G5(小鼠抗人外膜细胞;IgM),20Mg/mL,冰上孵育lh。用含1%BSA的PBSA洗两遍,600g离心6min。羊抗小鼠IgG或大鼠抗小鼠IgM结合磁珠的任意一个二抗孵育,4℃回转式混合仪40min。根据产品说明书推荐的方案,通过DyndMPC®-1磁分离器分离结合磁珠的细胞。


        (h)细胞计数,按(1〜10)×103个细胞/cm2密度接种到培养瓶或皿上。


        (i)在MSC培养基、37℃和5%CO2的培养箱中培养。


        (j)细胞分离后7天,用PBSA洗培养瓶,更换培养基。之后可以一周两次更换培养基,直至细胞达到汇合。

        来源:丁香实验

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