酿酒酵母的电穿孔转化法实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

材料的准备

一、单链载体 DNA 的制备 1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。 2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一性。 3. 在每次脉冲过后，吸取 100 μl 超声过的样品加到 1.5 ml 的微量离心管中，置于沸水浴中 5 分钟，冰水浴中快速冷却。 4. 当经过煮沸和快速冷

电穿孔转化法

1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。 2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，加 200 μl 灭菌水重悬细胞沉淀。 3. 加 100 μl 细胞悬液到 50 μl 含有 100~150 ng 需转化的 DNA 和 20 μg 单链载体 DNA 的溶液中，充