微生物实验

内容来源：精编分子生物学指南第五版。

极限培养基是指仅含碳水化合物和提供氮、磷、微量元素的无机盐的培养基。内容来源：精编分子生物学指南第五版。

血液培养基是一种含有脱纤维动物血（一般用兔血或羊血）的牛肉膏蛋白胨培养基，因此除培养细菌所需要的各种营养外，还能提供辅酶（如V因子），血红素（X因子)等特殊生长因子。 因此血液培养基常用于培养，分离和保存对营养要求苛刻的某些病原微生物。此外，这种培养基还可用来测定细菌的溶血作用。

马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、MgS04·7H2O、孟加拉红（玫瑰红，Rose Bengal）和链霉素等组成，其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，K2HPO4、MgS04·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷、镁离子。

高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。如果加人适量的抗菌药 物（如各种抗生素、酚等），则可用来分离各种放线菌。

棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。因此棉塞质置的优劣对实验的结果有很大的影响。正确的棉塞要求形状，大小，松紧与试管口（或三角烧瓶口）完全适合，过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，可以用于供作微生物 生长繁殖之用。

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。

肠道杆菌多为革兰氏阴性杆菌，具有内毒素，若引起败血症、脑膜炎等感染时，可用血液、脑脊液及体液等检测内毒素，以协助临床诊断。另外，在生产药剂等过程中，自然环境中产生内毒素的细菌也常污染注射制剂、生物制品等，出厂前也要严格检查。鲎试验可测出微量内毒素(0.1～1.0 ng/ml)。

有些细菌虽属于不同种或型，但其形态和菌落特点基本相同，只依靠形态和菌落的观察，不能加以区别。然而，这些不同种型的细菌，其物质代谢能力和产物常有所不同，借此可以鉴别细菌，即为细菌的生化反应检查，生化反应检查必须使用纯种细菌。本次实验的目的是了解细菌生化反应常用培养基的制备方法和学习常用于肠道杆菌鉴别的几种生化反应。

细菌形态学检查在临床微生物学检验工作中更重要体现在标本直接制片染色显微镜下观察，对于感染性疾病病原体的诊断有重要的意义。

质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。

经限制性内切酶酶切的质粒DNA5'端均带有磷酸集团，如用此载体直接转化大肠杆菌，其自身环化几率非常高，影响连接、转化效率。因此一般酶切的质粒DNA要经脱磷，使用碱性磷酸酶(CIAP)去除5'端磷酸集团。

制备好感受态细胞后，接下来就是质粒DNA转化入大肠杆菌细胞的过程。但要注意的是感受态细胞最好是新制备的，因为保存一定时间的感受态细胞会使转化率降低；此外DNA的浓度也要注意，不能太高。

动物细胞与胚胎工程实验常用培养液配制与检测，可用于（1）动物细胞的培养（2）胚胎工程的发展（3）分子生物学的研究。

食品中病原菌的检验主要包括食品原料及食品中各种病原菌的检验，如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肉毒梭菌及毒素、巴氏杆菌等19种病原菌。在此只介绍大肠希氏菌的检验，以掌握病原性大肠艾希氏菌检验的原理和方法。

大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。食品中大肠菌群数系以每100 g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number 简称MPN）表示。本实验是根据大肠菌群乳糖发酵产气量并结合MPN检索表来最终测定食品中大肠菌群量。

菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。可以使用平板培养计数法来测定食品中的菌落总数。

活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来，采用稀释平板菌落计数法检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。本实验宗旨是了解酸乳中乳酸菌分离原理及掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。

面包是是以面粉为主要原料，以酵母菌、糖、油脂和鸡蛋为辅料生产的发酵食品。在面粉和水的混和合物中加入酵母后,发生一系列的反应生成糖类及其它营养物质，再经过有氧呼吸和无氧呼吸,产生二氧化碳、醇、醛和一些有机酸等产物。生成的二氧化碳由于被面团中的面筋包围,不易跑出，经过烘烤后的面包充满多孔,形成海绵状并具有独特的清香。