蛋白质的生物合成标记实验

1. 培养悬浮细胞至对数增长期，室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。 2. 每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤，于室温300 g 离心5 min 回收细胞，小心重悬细胞并重复洗涤过程。 3. 以37℃的短时间标记培养基重悬至5×106细胞/ml，于37℃保温15 min 以耗尽细胞内的甲硫氮酸，间歇摇动。 4.

1. 在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×107）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。 2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。 3. 制备［35S］甲硫氨酸工作液。 4. 除去细胞上的培养液，加入2~4 ml［35S］甲

1. 准备和用［35S］甲硫氨酸标记细胞，用0.2~1 mCi/ml 的［35S］甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2. 脉冲标记后，除去［35S］甲硫氨酸培养基，用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次，加入10 ml 追加培养基继续培养。 3. 在37℃温育至设定时间。悬浮培养细胞在盖紧盖子的试管中旋转温育，贴附培养细胞在37℃ 5%CO2的加湿培养箱中培养。