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        甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞

        相关实验:蛋白质的生物合成标记实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞(0.5~2×107)至70%~90%汇片,吸去培养液,用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。

        2.  加入5 ml 于37℃短时间标记培养基,在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育15 min,以耗尽细胞内的甲硫氨酸。

        3.  制备[35S]甲硫氨酸工作液。

        4.  除去细胞上的培养液,加入2~4 ml [35S]甲硫氨酸工作液,在5%CO2的加湿培养箱于37℃温育30 min~3 h。

        5.  除去细胞上的培养液,用10 冰冷PBS缓冲液洗细胞1次后弃去,加入10 ml 冰冷PBS刮下培养皿上的细胞。
         
        6.  将细胞悬液移至15 ml 圆锥试管,于4℃ 300 g 离心5 min,弃上清。

        7.  处理和分析细胞。

        来源:丁香实验

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