蛋白质实验

分泌蛋白（secreted protein）是指在细胞内合成后，分泌到细胞外起作用的蛋白质，如消化酶、体液中的部分蛋白成分、抗体和部分激素等。因为分泌蛋白质常存在于成分复杂的体液中，如消化液、血液以及细胞培养的上清中，而且蛋白浓度常相对较低，所以需要使用灵敏度高、特异性好的方法进行分泌蛋白的含量测定。目前，用于细胞可溶性蛋白质的含量测定的方法主要有两种：免疫印迹法和酶联免疫吸附剂测定（enzyme

膜蛋白是存在于细胞质膜中的蛋白质分子，在细胞内分子运输、能量代谢、细胞和组织结构的维护以及细胞信号转导中发挥重要作用。目前，用于细胞膜蛋白提取的方法主要有三种：去垢剂和表面活性剂提取法、生物素化膜蛋白提取法和利用细胞膜糖蛋白的聚糖分离膜蛋白的方法。用于细胞膜中某一膜蛋白含量测定主要有三种：免疫沉淀法、免疫印迹法和在细胞原位采用流式细胞术。

蛋白表达常用检测实验，包括免疫印迹法、免疫沉淀法、点印迹法等。

氨基酸，是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物，化学式是 RCHNH2COOH。羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。氨基酸测序是一个古老的话题，早在 20 世纪 30 年代就已经开始使用各种方法研究氨基酸和多肽。

纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶）; 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是，必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分，因为很多 GPCR—旦被去污剂从质膜中提取出来就会变得不稳定。

NADPH-细胞色素C（P-450）是一种血红素蛋白，它是一个末端氧化酶，由于当它处于还原形式时，与一氧化碳结合形成一种亚铁羰基加成物。在可见光450nm处有最大的吸收峰，故命名为细胞色素P-450，和其他的天然血红素相同，分子中的铁原子是以与原卟啉IX呈符合物的形式存在，肝中含细胞色素P-450酶较丰富。

DNA 酶 I 足迹分析是检测和鉴定转录因子对 DNA 的序列特异性结合能力的一种有效方法（Galas 和 Schmitz,197S)。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍从 PEI 沉淀洗脱σ32 和 RNA 聚合酶需要的盐量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍什么透析条件可使可溶的重折叠σ32 单体得率最高的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

二喹啉甲酸（BCA）检测法是近来新研制的一种改进的 Lowery 测定法，反应简单而且几乎没有干扰物质的影响。来源：《蛋白质技术手册》

由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成「连续系统」和「不连续系统」两种电泳系统。「不连续系统」最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及 pH 不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH 也不相同。在实验中，电泳凝胶分为两层：上层胶为低浓度的大孔胶，称为浓缩胶或成层胶，配制此层胶的缓冲液是 Tr

PPO的纯化可应用于：（1）研究PPO营养机制；（2）PPO生理机制与调节。

PVDF膜上蛋白的可逆染色可以用于：Western杂交时，确认蛋白是否转至PVDF膜上。

TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。

心肌肌原纤维ATPase为Ca2+、Mg2+ATPase，分解ATP成ADP和Pi，并释放能量，提供肌原纤维收缩需要。肌原纤维的提取采用Salaro和Pagani法，主要采用差速离心和Triton X-100脱膜法。酶活性测定方法与肌浆网Ca2+ATPase的测定方法基本相同。

肝脏的细胞色素P450系统在药物的代谢中起着重要作用，它将药物由疏水型转化为更易排泄的亲水型。生物转化反应一般可分为细胞色素P450依赖的I相和II相结合反应。最近几年内已清楚药物的肝外代谢对体内药物总的降解起一定的作用。胃肠道内的生物转化是非常重要的，因为它可降低口服药物的生物利用度。遗传多态性、酶抑制、酶诱导及生理因素均可引起细胞色素P450活性的改变。这有一定的临床含意，因为这会引起药物药代

Lowry比色法是蛋白质测定最灵敏的方法之一。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

在适宜的条件下，T7 RNA聚合酶/启动子系统表达的基因产物可占细胞总蛋白的25%以上，但多数情况下产量比这个比例要低得多。

融合蛋白一般都作为抗原使用以刺激抗体的产生，许多情況下也可用于生化分析。目前两种广泛应用的大肠杆菌表达系统是利用pUR载体系列的lacZ融合系统及利用pATH载体系列的trpE融合系统。