总 RNA 提取实验

一、细胞或组织破碎 1. 微生物材料 （1）发酵3~4天（或对数生长期）的菌体，离心收集菌丝体（动植物材料无需此步处理）。 （2）用经DEPC处理的水洗菌丝体2~3次，并尽量除去残存的水。 （3）加液氮充分研磨，使其成为粉末，以释放RNA。 （4）研磨后的样品转移至12 ml 变性液的容器中匀浆。 2. 动植物细胞培养材料 （适用的样品量为细胞：108） （1）细胞或组织培养：按常

一、组织或细胞匀浆 1. 对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液，匀浆器高速匀浆2分钟。 2. 对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂-尿素溶液手工匀浆，并转移至Eppendof管中。 二、纯化 1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后，12 000 g 离心30分钟。 2. 取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素

一、 用于单层培养细胞 1. 室温下用PBS冼涤细胞，每平皿用5 ml，洗2次。 2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。 3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的细胞裂解液。 4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。 二、用于悬浮培养细胞 1. 用JS-4，2转子离心回收≤108细胞，重悬于相当于1/2原有体积的PBS，并再次离心

1. 组织来源材料：100 ng 组织加1 ul 变性液，在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。 2. 培养细胞：离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液（不需用生理盐水洗涤），每107细胞加入1 ml 变性液，然后用吸管抽吸7~10次。 3. 将匀浆移入5 ml 聚丙烯管子，加入0.1体积的2 mol/l pH4.0的乙酸钠缓冲液，混匀。 4. 加入1 ml 水饱和酚，混匀；再加入0.

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RNA 的提取通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提 RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于 RNA 酶无处不在，随时可能将 RNA 降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。

RNA 的提取通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提 RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于 RNA 酶无处不在，随时可能将 RNA 降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。