材料与仪器
步骤
一、 用于单层培养细胞
1. 室温下用PBS冼涤细胞，每平皿用5 ml，洗2次。
2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。
3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的细胞裂解液。
4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。
2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。
3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的细胞裂解液。
4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。
二、用于悬浮培养细胞
1. 用JS-4，2转子离心回收≤108细胞，重悬于相当于1/2原有体积的PBS，并再次离心回收细胞。
2. 往离心管中加入3.5 ml 异硫氰酸胍溶液。
3. 用装有20-G针头的6注射器将粘稠的细胞裂解液注返抽吸4次，并将其移至一个干净的试管中。
4. 在经硅化并高压过的13 mmx51 mm 的异质同晶聚合物超离心管中，加入1. 5 ml 5.7mol/l CsCl。
5. 并在此垫层上加入3.5 ml 细胞裂解液，界面应清晰。
5. 并在此垫层上加入3.5 ml 细胞裂解液，界面应清晰。
6. 于18℃用Beckman SW-55转子150 000 g 离心12~20 h（缓慢加速和减速）。
7. 用巴斯德吸管的管尖在液面上吸取上清，管子随液面的下降而下降。
8. 当吸至仅剩约100 ul 时，小心倒置管子，倒出剩余液体。
7. 用巴斯德吸管的管尖在液面上吸取上清，管子随液面的下降而下降。
8. 当吸至仅剩约100 ul 时，小心倒置管子，倒出剩余液体。
9. 晾干沉淀约5~10 min，然后以360 ul TES溶液重溶沉淀，反复地以吸管上下抽吸。
10. 如此在室温进行5~10 min，转移溶液于另一干净的微量离心管。
11. 加入40 ul 3mol/l pH5.2的乙酸钠缓冲液和1 ml 无水乙醇。
12. 在干冰/乙醇中沉淀30分钟，离心10~15 min，用360 ul 水重溶沉淀并重复沉淀过程。
13. 让沉淀晾干10 min，溶解于200 ul 水，取10 μl 稀释至1 ml 测A260和A280。
14. 以水溶液或乙醇沉淀的形式在-70℃贮存RNA。
10. 如此在室温进行5~10 min，转移溶液于另一干净的微量离心管。
11. 加入40 ul 3mol/l pH5.2的乙酸钠缓冲液和1 ml 无水乙醇。
12. 在干冰/乙醇中沉淀30分钟，离心10~15 min，用360 ul 水重溶沉淀并重复沉淀过程。
13. 让沉淀晾干10 min，溶解于200 ul 水，取10 μl 稀释至1 ml 测A260和A280。
14. 以水溶液或乙醇沉淀的形式在-70℃贮存RNA。
注意事项
1. 1~5步的操作均在室温进行。
来源：丁香实验
