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        相对 RT-PCR: 引物与竞争子比例的决定实验

        实验分类:

        PCR 技术

        最新修订时间:

        简介

        这个方案的目的是要选择一个 18SrRNA 引物和竞争子之间的恰当比例,可以模仿目的转录本的表达量。对于大多数转录本来说,一般比例为 3:7。对于模板比较稀少的,采用2:8 或 1:9 可能更恰当。准备的 PCR 反应混合物应比 5 个反应多 10%。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

        来源:丁香实验

        操作方法

        相对 RT-PCR: 引物与竞争子比例的决定实验

        一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 去除 RNA 酶的双蒸水 10XRT-PCR 缓冲液(100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2) 2. 酶和酶缓冲液 Taq DNA 聚合酶(5U/ul) 3. 核酸和寡核苷酸 cDNA(来自方案 1) dNTP 混合物(10 mmol/L, 包含所有四种 dNTP) 基因特异的

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