PCR 技术

是对差异显示技术（DD）实验中标签酶技术的补充 现代神经科学研究技术 作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军

通过让两个互补的引物退火构建接头，首先应使引物 1B 和 2B 的 5'末端磷酸化。 现代神经科学研究技术 作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军

本实验介绍胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍关于PCR 组装反应的过程。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

本实验介绍凝胶纯化的方法。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

本实验介绍如何定制 40bp 寡核苷酸的过程。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

迄今为止，基因只是被用来在细菌中表达，因此不知道这种简单的策略是否也能在更高等的植物的转基因中发挥作用。在 CAPITALS 中的软件程序来自 DNALYSIS 软件的 DOS Compugene suite，可以从作者（W.M.B) 处获得运行在 Windows 下的版本。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

本实验介绍关于通过重叠延伸和基因 SOEing 进行 PCR 突变的过程。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用 Pfu DNA 聚合酶除去延伸出的碱基，提高了平末端连接的效率。本实验来源于 PCR 实验指南（第二

诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变，而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

本实验介绍顺磁性链霉抗生物素蛋白珠子的纯化。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

这个方案只是用 RNA 酶处理 PCR 产物的一种方法。有很多可选择和有效的途径来纯化 PCR 产物以除去引物，接着用酶处理 PCR 产物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR仪设置温浴程序是很方便的。可以在加热步骤完成后选择加上“冷却”步骤，即在冷模块中放置 5 min 甚至过夜。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

菌落 PCR 分析克隆的重组体实验可应用于：（1）分析由转化细胞产生的菌落是否含有重组插入片段；（2）鉴定插入物的存在和方向。

本实验介绍PCR产物制备克隆的方法。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

本实验介绍插入片段的准备工作。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点，PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中，同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载体中的问题。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

在该方案中，用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp)，产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库，是通过利用表型的和生化的筛选方法，分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶处理后，基因组 DNA 片段成为平末端，然后连接到 Pml Ⅰ (—个可以产生平端产物的酶）线性化的载体上，再转化细菌，扩增得到文库。本实验来

该方案中，用 PCR 分析由质粒载体编码的随机多肽文库。该文库是由连接反应的产物转化细菌后得到的，方案 2 已经介绍过，然后再用标准的程序对质粒进行扩增和纯化。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

由 PCR 产生的合成 DNA 文库，可以经过酶切消化，连接到线性化的表达载体系统上。在这里所列的方案中，文库的 5’（NotⅠ）和 3'(ClaⅠ) 末端是不同的酶切位点，也用同样的酶切位点克隆进载体。可以用 PCR 分析线性化反应和连接反应的效率。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

这里介绍的方法，是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似，使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物，在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物（如上所述）也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。