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        用 PCR 控制基因组 DNA 文库的质量实验

        实验分类:

        PCR 技术

        最新修订时间:

        简介

        在该方案中,用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp),产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库,是通过利用表型的和生化的筛选方法,分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶处理后,基因组 DNA 片段成为平末端,然后连接到 Pml Ⅰ (—个可以产生平端产物的酶)线性化的载体上,再转化细菌,扩增得到文库。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

        来源:丁香实验

        操作方法

        用 PCR 控制基因组 DNA 文库的质量实验

        一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 ddH20 2. 酶和酶缓冲液 10X Vent 缓冲液 Vent DNA 聚合酶 3. 核酸和寡核苷酸 dNTP,各 20 mmol/L PCR 引物,可以与基因组 DNA 文库克隆位点两侧的载体序列退火 质粒 DNA(见下面第 1 步) 4. 特殊设备 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备,包括溴化乙锭 (见第 5 步) 热循环仪 二、方

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