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        帽子转换 RACE 实验

        实验分类:

        PCR 技术

        最新修订时间:

        简介

        这里介绍的方法,是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似,使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物,在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物(如上所述)也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。

        来源:丁香实验

        操作方法

        帽子转换 RACE 实验

        试剂 5'RACE 能否成功依赖于帽子发现接头序列结合在 cDNA 合成的起始处。这一步依赖于在第一链 cDNA 末端附加额外的寡核苷酸(dC)。已有证据显示,反转录缓冲液如果存在Mn2+,能大大提高这一步的效率(SchmidtandMueller1999)。 第 1 阶段:反转录产生 cDNA 模板 一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 dNTP 溶液(含 4 种 dNTP, 各 10m

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