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蔗糖磷酸化酶生化试剂盒

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  • 2025年07月14日
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    • 英文名

      Sucrose Phosphorylase Test Kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      50管/48样

    产品细节图片1
    蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)试剂盒
    分光光度法 50 管/48 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义

    SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP 还能催化氢醌合成熊果苷, 具有极强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。

    测定原理

    SP 能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6- 磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH,导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率,即可计算 SP 活性。

    自备实验用品及仪器

    天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制
    提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 6mL 蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃ 保存,禁止反复冻融。
    试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 12mL 蒸馏水水溶解;用不完的试剂分装后
    -20℃保存,禁止反复冻融。粗酶液提取
    1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清待测。
    2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104  个):提取液体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

    测定操作表

    1. 分光光度计预热 30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
    2. 操作表
    试剂名称 对照管 测定管
    试剂一(μL) 600 600
    试剂二(μL) 100 100
    试剂三(μL) 200 200
    样本(μL)   100
    蒸馏水(μL) 100  
    迅速混匀,于 1mL 石英比色皿,37℃下测定 340nm 的初始吸光值与反应 2min 后的吸光值,
    测定管记作A1 与A2,对照管记作A3 与A4,△A=(A2- A1)-(A4- A3)。

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    产品细节图片2产品细节图片3

    SP 活性计算公式

    1. 按照蛋白浓度计算
    酶活定义:37℃,pH6.8 时,每毫克蛋白质每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
    DA

    SP 活性(nmol/min/mg prot)= e ´ d ×V 反总÷V 样÷Cpr÷T=804× △A÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
     
    酶活定义:37℃,pH6.8 时,每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
    DA

    SP 活性(nmol/min/g 鲜重)= e ´ d ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=804× △A÷W
    1. 按照细胞数量计算
    酶活定义:37℃,pH6.8 时,每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
    DA

    d
    SP 活性(nmol/min/104 cell)= e ´     ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))÷T=804× △A÷细胞数量(万个)
    e :NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL; V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min

    注意事项

    1. 可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
    2. 样本较多时,可以按照每个样本试剂一:试剂二:试剂三=600:100:200(μL)的比例配制工作液,用多少配多少,临用前立刻配制,10 分钟内使用。
    产品细节图片4

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