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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Sucrose Phosphorylase Test Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/48样

蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)试剂盒
分光光度法 50 管/48 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP 还能催化氢醌合成熊果苷, 具有极强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。测定原理
SP 能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6- 磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH,导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率,即可计算 SP 活性。自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 6mL 蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃ 保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 12mL 蒸馏水水溶解;用不完的试剂分装后
-20℃保存,禁止反复冻融。粗酶液提取
- 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清待测。
- 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作表
- 分光光度计预热 30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
- 操作表
| 试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一(μL) | 600 | 600 |
| 试剂二(μL) | 100 | 100 |
| 试剂三(μL) | 200 | 200 |
| 样本(μL) | 100 | |
| 蒸馏水(μL) | 100 | |
| 迅速混匀,于 1mL 石英比色皿,37℃下测定 340nm 的初始吸光值与反应 2min 后的吸光值, 测定管记作A1 与A2,对照管记作A3 与A4,△A=(A2- A1)-(A4- A3)。 相关图片: ![]() ![]() |
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SP 活性计算公式
- 按照蛋白浓度计算
DA
- 按照样本质量计算
DA
- 按照细胞数量计算
DA
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e :NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL; V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min
注意事项
- 可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
- 样本较多时,可以按照每个样本试剂一:试剂二:试剂三=600:100:200(μL)的比例配制工作液,用多少配多少,临用前立刻配制,10 分钟内使用。
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文献和实验1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活,必须了解酶催化反应总的反应式,而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量,使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
针对同一指标,生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗?
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律,但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应,其反应过程可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图,如下所示: 延迟区:无规律可寻。 等速区:对应的是速率法,一般应用于酶活力的检测。 过渡区:对应的是固定时间法,目的是解决某些化学反应的非特异性问题,提高准确度。 平衡区:对应的是终点法,主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
蔗糖磷酸化酶 sucrose phospholylase 催化蔗糖的磷酸分解的酶。EC.2.4. 1.7.蔗糖+Pi α-D-葡萄糖-1磷酸+果糖。在添加蔗糖的培养基上生长发育的细菌的菌体中可以发现该酶(例如Pseudomonas saccharophila)。虽然,反应的平衡点有几个是偏向于右方,但在有捕捉Pi(无机磷酸)的试剂存在下,可偏向左方,即进行蔗糖的合成。该酶也催化葡糖基转化反应。 蔗糖+L-山梨糖 α-葡糖基-山梨糖+果糖蔗糖
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