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- XK-SJH-A364
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Acetyl-CoA (Acetyl-CoA) kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
25管/24样
乙酰辅酶 A（ Acetyl-CoA）含量测定试剂盒
分光光度法 25 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
乙酰辅酶 A 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶 A 汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于 ATP 合成。此外，乙酰辅酶A 是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
测定原理
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD 生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶 A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶 A 含量的高低。需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：液体 10μL×1 支，4℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加入 22.5mL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.92 m L），将试剂二、三和四按照 1:1:90 的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定 24 样）；加样前置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴锅中预热 30 min；现配现用；
乙酰辅酶 A 的提取
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计预热 30min，用蒸馏水于 340nm 处调零。2、取 920μL 工作液和 100μL 样本至 1mL 石英比色皿，混匀，立即记录 340nm 处 20s 的吸光值 A1 和 80s 时的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
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乙酰辅酶 A 含量计算
标准条件下测定的回归方程为 y = 1640x + 0.012；x 为吸光值，y 为标准品浓度（nmol/mL）。注意：本试剂盒最低检测限为 1.6nmol/mL。
- 按照蛋白浓度计算
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
- 按照样本质量计算
÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
乙酰辅酶 A 含量(nmol/104)=[(1640×ΔA＋0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×ΔA＋0.012)÷500
V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
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文献和实验乙酰辅酶 A acetyl CoA 由辅酶 A（ CoA）的 SH基与乙酰基形成的硫酯键所构成。 CH， CO-S-CoA（不写 S，也可写成 CH3-CO-CoA）。此键是高能键Δ G°′ =-7.7千卡，在生物体内的乙酰化反应中作为乙酰基的供体。由林南（ F.Lyne， 1951）从酵母中分离出来，证明它是被称为活化乙酸的实体。在丙酮酸经丙酮酸脱氢酶复合体的催化反应中，在脂肪酸的β氧化中，以及在乙酸的活化反应（乙酰 CoA合成酶 EC6.2.1.1）均可生成乙酰辅酶 A，这个乙酰
乙酰辅酶A羧化酶 acetyl-CoA catboxyla-se
乙酰辅酶 A羧化酶 acetyl-CoA catboxyla-se 催化乙酰辅酶 A＋ ATP＋ HCO3-→丙二酰辅酶 A ADP＋ Pi反应的生物素酶。广泛存在于生物界。此反应制约着脂肪酸合成第一阶段的速度。本反应由二个步骤组成，即利用 ATP把 CO2 固定在酶所结合的生物素上和把 CO2转移给乙酰辅酶 A的反应。大肠杆菌或植物中的这种酶可以区分为催化这二个反应的蛋白质和结合生物素的蛋白质，而动物或酵母中的这种酶则不能分开，动物的酶是一种变构酶，原体不显示活性，而聚
转乙酰酶 transacetylase，acetyl transfer- ase 催化乙酰基转移反应的酶之总称，也称为乙酰转移酶。反应是把乙酰辅酶A（CoA）作为乙酰基供体进行各种特异反应而生成酯（例如胆碱乙酰基转移酶）、酰胺（amide）衍生物、硫酯（thioester）（例如硫辛酸转乙酰酶）、酮、乙酰磷酸（例如磷酸乙酰转移酶），有的也可进行可逆反应。
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