- ￥2980
- Xkbio
- XK-SJH-A488
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Sucrose Phosphorylase Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）试剂盒
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外，SP 还能催化氢醌合成熊果苷， 具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。测定原理：
SP 能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6- 磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率，即可计算 SP 活性。自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。试剂组成和配制：提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 支，-20℃避光保存，临用前加 2.5mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存，临用前加 5mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃ 保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
- 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清待测。
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作表：
- 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm。
- 操作表
| 试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一（μL） | 120 | 120 |
| 试剂二（μL） | 20 | 20 |
| 试剂三（μL） | 40 | 40 |
| 样本（μL） | 20 | |
| 蒸馏水（μL） | 20 | |
| 迅速混匀，于 96 孔板，37℃下测定 340nm 的初始吸光值与反应 2min 后的吸光值，测 定管记作A1 与A2，对照管记作A3 与A4，△A=（A2- A1）-（A4- A3）。 相关图片：   |
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SP 活性计算公式：
- 按照蛋白浓度计算
DA
- 按照样本质量计算
DA
- 按照细胞数量计算
细胞数量（万个）
DA
×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量（万个）)÷T=1608× △A÷
e ：NADPH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：反应体系中样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；Cpr：蛋白浓度， mg/mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2min
注意事项：
- 可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
- 样本较多时，可以按照每个样本试剂一：试剂二：试剂三=120：20：40（μL）的比例配制工作液，用多少配多少，临用前立刻配制，10 分钟内使用。
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文献和实验蔗糖磷酸化酶 sucrose phospholylase 催化蔗糖的磷酸分解的酶。EC．2．4． 1．7．蔗糖＋Pi α-D-葡萄糖-1磷酸＋果糖。在添加蔗糖的培养基上生长发育的细菌的菌体中可以发现该酶（例如Pseudomonas saccharophila）。虽然，反应的平衡点有几个是偏向于右方，但在有捕捉Pi（无机磷酸）的试剂存在下，可偏向左方，即进行蔗糖的合成。该酶也催化葡糖基转化反应。 蔗糖＋L－山梨糖 α－葡糖基－山梨糖＋果糖蔗糖
催化糖苷键进行可逆的磷酸分解的一类酶之总称。参与生物体内多糖和核苷等糖苷的合成和分解。狭义的指α -葡聚糖磷酸化酶。（ 1）α -葡聚糖磷酸化酶（α -glucan phosphorylase），广泛分布于动物（肝脏），植物、微生物中，已从马铃薯中分离出结晶。淀粉（淀粉磷酸化酶）和糖原（糖原磷酸化酶）的磷酸分解，生成 1- 磷酸葡萄糖。 （ 2）蔗糖磷酸化酶：在微生物嗜糖假单胞菌（ Pseu－ domonas
下，可水解成葡萄糖和果糖。某些细菌（ Pseudomouas saccharophila ， Leucon － ostoc mesenteroides 等）具有磷酸化酶（ EC 2 ． 4 ． 1 ． 7 ）在磷酸存在下，可将蔗糖分解成 1- 磷酸 - α -D- 葡萄糖和 D- 果糖。另一方面已知合成蔗糖的酶反应是从 UDP- 葡萄糖向 D- 果糖或 D － 6- 磷酸果糖的葡萄糖苷基的转移反应。前者是可逆反应，在生理上往往是趋向分解方向，也就是说，起供给 UDP- 葡萄糖的作用的可能性强
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