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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Sucrose Phosphate Synthase (SPS) Test Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/24样

蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS(EC 2.4.1.14)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。测定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化, 在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成和配制
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 4mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存; 试剂三:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 40mL×1 瓶,4℃保存; 试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃保存; 样品测定的准备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 30 | 30 | ||
| 蒸馏水 | 150 | 150 | 180 | |
| 试剂二 | 30 | |||
| 试剂一 | 150 |
| 试剂三 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 试剂四 | 700 | 700 | 700 | 700 |
| 试剂五 | 200 | 200 | 200 | 200 |
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SPS 活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(μg /min/mg prot)= C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
SPS 活性(μg /min /g 鲜重) = C 标准管×V1×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL; V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min。
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文献和实验SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直板型电泳)(图)
低分子量标准蛋白试剂盒,中国科学院上海生物化学研究所东风生化试剂厂生产(表16-2)。 表16-2 5种标准蛋白质 每种蛋白含量为40μg。用时加入200μl样品溶解,经处理后,上样10μl(2μg)就能显示出清晰的条带。 ③自己配制低分子量或高分子量标准蛋白质混合试剂。如买不到标准蛋白试剂盒时,可参考常用的标准蛋白质及其分子量表。从中选择3~5种蛋白质,如马心细胞色素C(Mr12 500)、牛胰胰凝乳蛋白原A(Mr25 000)、猪胃胃蛋白酶(Mr35 000)、鸡卵卵清蛋白
联有ATP的磷酸键断裂的酶类。例如,谷氨酰胺合成酶、氨基酸:tRNA连接酶等。 二、酶的命名 (一)习惯命名法 1.一般采用底物加反应类型而命名,如蛋白水解酶、乳酸脱氢酶、磷酸己糖异构酶等。 2.对水解酶类,只要底物名称即可,如蔗糖酶、胆硷酯酶、蛋白酶等。 3.有时在底物名称前冠以酶的来源,如血清谷氨酸-丙酮酸转氨酶、唾液淀粉酶等。 习惯命名法简单,应用历史长,但缺乏系统性,有时出现一酶数名或一名数酶的现象。 (二)系统命名法 鉴于新酶
指生物体内由葡萄糖等单糖合成糖原的过程。为糖原分解的逆过程。将更普遍的用低分子的乳糖等通过糖酵解的逆过程而生成糖原的过程称糖异生以资与之区别。动物主要在肝脏或肌肉中进行,为能源储藏的一个主要过程。食物消化后由消化器官吸入血液中的葡萄糖,通过肝门脉而运到肝脏,在那里在已糖激酶和 ATP的作用下先磷酸化成 6-磷酸葡萄糖,再经 1-磷酸葡萄糖而成 UDP葡萄糖,再在糖原合成酶的作用下生成糖原。此时形成α- 1, 4-糖苷键,但其α- 1, 6键由称为脱支酶的一种转糖苷酶的协同
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