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- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Phosphofructokinase (PFK)/6-phosphofructokinase/fructose-6-phosphokinase test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
果糖-6-磷酸激酶（6-phosphofructokinase，PFK）试剂盒
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
PFK（EC 2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP 转化为果糖-1,6 二磷酸和 ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。
测定原理
PFK 催化果糖-6-磷酸和 ATP 生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，bing酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PFK 活性。需自备的仪器和用品紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂四：液体 8μL×1 支，4℃保存；
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 在试剂二瓶中加入 17mL 试剂一和 1.13mL 蒸馏水充分溶解，置于 37℃（哺乳动物） 或 25℃（其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
- 在试剂三中加入 1mL 蒸馏水充分混匀，冰上放置备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
- 在试剂四中加入 1mL 蒸馏水充分混匀，冰上放置待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
- 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂三、10μL 试剂四和 170 μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 10min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
说明活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算公式中乘以相应稀释倍数），或缩短反应时间至 2min 或 5min,使 ΔA<0.5，以提高检测灵敏度。
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PFK 活力单位的计算
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 转化为 1nmol
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。PFK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=321×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 PFK 活力计算：
- 按样本蛋白浓度计算：
-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
PFK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=321×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(2000×V 样÷V 样总)÷T=0.1605×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细菌或细胞总数，2000 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 转化为 1nmol
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。PFK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=642×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 PFK 活力计算：
- 按样本蛋白浓度计算：
-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=642×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
PFK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=642×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(2000×V 样÷V 样总)÷T=0.321×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细菌或细胞总数，2000 万。
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技术资料磷酸果糖激酶（PFK）/6-磷酸果糖激酶/果糖-6-磷酸激酶测试盒
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