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- XK-SJH-A110
- 国产
- 2026年03月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
NADP-malate dehydrogenase (NADP-MDH) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD- 依赖的 MDH 和NADP-依赖的 MDH， NADP-MDH 主要存在于真核细胞中。
测定原理：
NADP-MDH 催化 NADPH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。试剂的组成和配制：
试剂一、提取液 60 mL×1 瓶，在 4℃保存； 试剂二、液体 50 mL×1 瓶，在 4℃保存；试剂三、粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 300μL 蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四、粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 300μL 蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
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测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 将试剂二在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、操作表：
| 试剂名称（μL） | 测定孔 |
| 样本 | 20 |
| 试剂二 | 760 |
| 试剂三 | 10 |
| 试剂四 | 10 |
后的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2。
注意：若 A1-A2 大于 0.5，需将样本用提取液稀释，使 A1-A2 小于 0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
1、血清（浆）NADP-MDH 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=6430×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 NADP-MDH 活力的计算:
- 按样本蛋白浓度计算：
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
NADP-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T =6430×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
NADP-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×500）÷T=12.86×ΔA
V 反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。
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文献和实验为催化苹果酸脱羧反应的酶。正式名称称为苹果酸脱氢酶（脱羧作用）。已知有三种苹果酸酶（ EC1． 1． 1． 38— 40）。其中以 NADP为受体的酶（ EC1． 1． 1． 40）催化生成下列反应： Δ G°′ =-0.36千卡。丙酮酸羧化反应（是 H． G． Wood和 C． H． Werkman， 1938最初发现的反应）中有的是苹果酸酶的作用，有的是丙酮酸羧化酶的作用，在生物体内已知以后者的作用为主。两者都是供给三羧酸循环中间体的补充反应
物；(3)这个三元复合物与HCO-3作用产生羧基磷酸与PEPC·Mg2+ 和烯醇式丙酮酸复合物，前者释放出CO2与Pi；(4)CO2与PEPC·Mg2+·烯醇作用产生OAA与PEPC·Mg2+ ，OAA为羧化反应的产物，PEPC·Mg2+ 则再次进行反应。PEPC是胞质酶，主要分布在叶肉细胞的细胞质中，分子量400 000，由四个相同亚基组成。PEPC无加氧酶活性，因而羧化反应不被氧抑制。 2.还原或转氨阶段 OAA被还原成苹果酸或经转氨作用形成天冬氨酸。 (1)还原反应 由NADP-苹果酸脱氢酶
亦称四碳二羧酸循环（ C4 -dicarboxylic cycle）。光合碳同化的辅助途径。起源于热带及亚热带的一些植物，在其光合作用的暗反应中，二氧化碳首次被固定的接受体是磷酸烯醇式丙酮酸（ PEP）。在 PEP羧化酶催化下形成 C4 -羧酸——草酰乙酸。在 NADP-苹果酸脱氢酶催化下，还原为苹果酸（ C4 -酸），它由叶肉细胞运到维管束鞘细胞的叶绿体中。经脱羧释放二氧化碳并形成 C3 -酸， C3 -酸又回到叶肉细胞，转变成 PEP，又可接受二氧化碳，该循环由于固定
