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- XK-SJH-A227
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Hydrogen peroxide (H2O2) kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
H2O2 是生物体内最常见的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化产生，由 CAT 和 POD 等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子，。
测定原理：
H2O2 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、bing酮 100mL、浓盐酸 5mL、研钵和冰。试剂的组成和配制：
试剂一：bing酮 100mL×1 瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存；(溶解时间较长，约 30min，可 40℃-60℃加热，务必提前准备)
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； H2O2 提取：
1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；用试剂一定容至 1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；转移至 EP 管中，用试剂一定容至 1mL，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。2、 将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂
| 试剂名称（μL） | 测定 | 对照 |
| 样本 | 250 | |
| 试剂一 | 250 | |
| 试剂二 | 25 | 25 |
| 试剂三 | 50 | 50 |
| 试剂四 | 250 | 250 |
415nm 处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 ΔA＝A 测定-A 对照。
相关图片：
注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
H2O2 含量计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
2、血清（浆）中 H2O2 含量的计算：
H2O2 含量（μmol/mL）＝(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
3、细菌、细胞或动物组织中H2O2 含量计算
- 按照蛋白浓度计算
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
- 按照样本质量计算
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
H2O2 含量(μmol/104)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
2、血清（浆）中 H2O2 含量的计算：
H2O2 含量（μmol/mL）＝(ΔA-0.0006)÷0.3744=2.67×(ΔA-0.0006)
3、细菌、细胞或组织中 H2O2 含量计算
- 按照蛋白浓度计算
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
- 按照样本质量计算
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
H2O2 含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(500×V1÷V2)= 0.0054×(ΔA-0.0006)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
注意：标曲线性范围为 0.1μmol/mL-2μmol/mL，吸光度 ΔA 线性范围为 0.03-1，若 ΔA 超过
1 则需要稀释，计算公式乘以相应稀释倍数。
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