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- XK-SJH-A380
- 国产
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
69
- 英文名：
Hexokinase (HK) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
己糖激酶(hexokinase，HK)试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
HK（EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
测定原理
HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH 在 340nm 有特征吸收峰。需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 30mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 30mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 试剂一和 250μL 蒸馏水充分溶解备用； 用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 将试剂一、二、三、四和五 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、 加样表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 试剂一 | 400 |
| 试剂二 | 400 |
| 试剂三 | 80 |
| 试剂四 | 80 |
| 试剂五 | 40 |
| 试剂六 | 8 |
| 样本 | 30 |
波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度A2，计算 ΔA=A2-A1。
注意事项
1、为了减小操作误差，建议将试剂一、二、三、四、五按比例配成混合液，预热 10min， 取 30μL 样本+8μL 试剂六+1mL 混合液，混匀后按照上述步骤检测。2、不同匀浆组织中 HK 活力不一样，做正式试验之前请做 1-2 只预试，若 ΔA>0.5，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算公式中乘以相应稀释倍数），或缩短反应时间至 2min,使 ΔA<0.5，以提高检测灵敏度。
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HK 活性计算
1、血清（浆）HK 活性单位的定义：每毫升血清（浆）在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷V 样÷T= 1113×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
- 按样本蛋白浓度计算
HK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T= 1113×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
HK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷( W ×V 样÷V 样总) ÷T= 1113×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
HK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷( 500×V 样÷V 样总) ÷T= 2.226×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.038×10 -3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL； T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活，必须了解酶催化反应总的反应式，而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量，使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
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