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过氧化氢H2O2试剂盒

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  • 2025年09月11日
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    • 英文名

      过氧化氢H2O2试剂盒

    • 保质期

      12个月

    • 供应商

      上海酶联生物科技有限公司

    • 保存条件

      避光,低温保存

    • 规格

      100管/96样

     
    过氧化氢H2O2试剂盒

    过氧化氢H2O2试剂盒

    微量法
    注    意:
    正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:
    H2O2是生物体内常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子,。

    测定原理:
    H2O2与硫酸钛生成的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。

    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙tong100mL、浓盐酸5mL、研钵和冰。

    试剂的组成和配制:
    试剂一:丙tong100mL×1瓶,4℃保存;(自备)
    试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存;(溶解时间较长,约30min,可40℃-60℃加热,务必提前准备)
    试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存;
    试剂四:液体30mL×1瓶,4℃保存;

    H2O2提取: 
    1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1mL;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
    2. 组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1mL,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
    3、血清(浆)样品:直接检测。

    过氧化氢H2O2试剂盒

    测定步骤:
    1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。
    2、将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
    3、在EP管中按顺序加入下列试剂
    试剂名称μL 测定 对照
    样本 250  
    试剂一   250
    试剂二 25 25
    试剂三 50 50
    4000g25离心10min,弃上清,留沉淀
    试剂四 250 250
    加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA=A测定-A对照。

    注意事项:
    1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。
    2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。


    H2O2含量计算:
    a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x为标准品浓度,μmol/mL;y为ΔA)。
    2、血清(浆)中H2O2含量的计算:
    H2O2含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
    3、细菌、细胞或动物组织中H2O2含量计算
    (1)按照蛋白浓度计算
    H2O2含量(μmol/mg prot)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr
    需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
    (2)按照样本质量计算
    H2O2含量(μmol/g鲜重)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W
     (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
    H2O2含量(μmol/104)=[ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006) 
    V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。
    b.用96孔板测定的计算公式如下
    1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.3744x + 0.0006  (x为标准品浓度,μmol/mL;y为ΔA)。
    2、血清(浆)中H2O2含量的计算:
    H2O2含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006)÷0.3744=2.67×(ΔA-0.0006)
    3、细菌、细胞或组织中H2O2含量计算
    (1)按照蛋白浓度计算
    H2O2含量(μmol/mg prot)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(V1×Cpr)=2.67×(ΔA-0.0006) ÷Cpr
    需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
    (2)按照样本质量计算
    H2O2含量(μmol/g鲜重)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(W ×V1÷V2)= 2.67×(ΔA-0.0006) ÷W
    过氧化氢H2O2试剂盒 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
    H2O2含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(500×V1÷V2)= 0.0054×(ΔA-0.0006) 
    V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

    注意:标曲线性范围为0.1μmol/mL-2μmol/mL,吸光度ΔA线性范围为0.03-1,若ΔA超过1则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。
     

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