TriZol 总RNA提取试剂

产品货号：R1000
储存条件：TriZol总RNA提取试剂在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2~8°C的环境下。

重要提示：
本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
产品介绍：
TriZol 总RNA提取试剂是广谱型总RNA 提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在TriZol总RNA提取试剂中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA 的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。

TriZol总RNA提取试剂试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间(tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳，28S的位置大约在2kb，18S大约在1kb的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。
注意事项：
1.样品用TriZol总RNA提取试剂匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1 年。RNA 半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot 等。



2.若下游实验对DNA非常敏感，建议用RNase free DNase I对RNA进行处理。

3.自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC 处理过的水配制)、RNase free water或者DEPC 处理过的水。

4. 本公司生产TriZol总RNA 提取试剂Reagent 质量优异，可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取质量和下游实验完全一样。
RNA 抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
用TriZol总RNA提取试剂抽提RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明，所有的操作应该在在15~30°C的室温条件下。

1.匀浆
a. 植物组织：
取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TriZol 总RNA提取试剂中迅速研磨，每50-100mg组织加入1ml TriZol总RNA提取试剂，混匀。注意：样品体积一般不要超过TriZol总RNA提取试剂体积的10%。
b. 动物组织：
取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每30-100mg组织加入1ml TriZol总RNA提取试剂，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TriZol总RNA提取试剂1ml混匀。注意：样品体积一般不要超过TriZol总RNA提取试剂体积的10%。
c. 单层培养细胞：
尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TriZol总RNA提取试剂覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TriZol总RNA提取试剂量（每10cm2加1ml）。当TriZol总RNA提取试剂量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
注意：
贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部RNA，继续做即可。
d. 细胞悬液：
离心收集细胞。在TriZol总RNA提取试剂试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×


106的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TriZol 总RNA提取试剂。在加入TriZol总RNA提取试剂前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
f. 血液：
使用TriZol 总RNA提取试剂Reagent LS。

2.将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。

3.可选步骤：
在4°C的条件下以12,000 rpm 的离心力离心10分钟，取上清。
如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时，上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

4.每1ml TriZol 总RNA提取试剂加0.2ml 氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15 秒并将其在室温下放置2~3 分钟。

5.在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TriZol总RNA提取试剂容量的50-60%。（有机层和中间层是蛋白和DNA，如果需要提取，请联系我们索取提取方法）。

6.将水样层转移到一干净的离心管中，加入等体积异丙醇。颠倒混匀后室温放置10 分钟。
RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

7.在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10 分钟，弃上清。

8.加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1 ml TriZol 总RNA 提取试剂用1 ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。

9.在室温或者4°C 12,000 rpm 离心3分钟，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

10.室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA 保存在-70℃， 防止降解。

注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。