快速内切酶DpnI

产品货号：F5585S
储存条件：-20℃                                                    

同裂酶：MalI
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

组分	规格
LabFD™ DpnI	50ul
10×LabFD™ Buffer	1ml
10×LabFD™ Color Buffer	1ml

产品简介
LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer 中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。
建议的反应条件：
1× LabFD™缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育20min。
质量控制


功能活性检测
最适反应温度下，在20ul反应体系中，1ul LabFD™ DpnI能够在15min 内完全消化1ug pUC19 DNA。
超长时间温育检测
最适反应温度下，将1ul LabFD™ DpnI 与 1ugpUC19 DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测
最适反应温度下，使用 1ul LabFD™ DpnI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测
最适反应温度下，将1ul LabFD™ DpnI与1ug超螺旋质粒DNA共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测
将含有单一lacZα基因的载体以1ul LabFD™ DpnI消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于LabFD™系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
使用方法
1.DNA快速酶切流程
1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

	质粒 DNA	PCR 产物	基因组 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer	2ul	3uL注	5ul
底物DNA	2ul(up to 1ug)	10ul (~0.2ug)	10ul (5ug)
LabFD™ DpnI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

注：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR具备一定的离子强度，10xLabFD^TMbuffer加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。


2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
3）37℃温育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60min（基因组DNA）；
4）80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应。
2.双酶切或多酶切
1）每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；
2）所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
适用于质粒的扩大反应体系

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
LabFD™ DpnI	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
116	0	22	15	15	8	7	87

甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
不切割Dam’DNA	无影响	无影响	无影响	序列可能重叠 剪切可能受影响

在不同反应缓冲液中的活性

	LabFD™ Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	100%	100%	100%

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测