1ug质粒干粉

重组腺病毒构建、扩增及纯化

2.5×1010个细胞/ml）。分装，-80℃或液氮保存待用。 2、病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3、将1-5ul （约1ug） 线性化的穿梭质粒及1ul（约100ng/ul）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40ul BJ5183电转感受态的EP管中混匀，冰上冷却。 4、将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5、电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6、取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性

【原创】入门级T载体构建过程

在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验，所以我这里写的T载体构建只能算是入门级，给新手提供一点思路，有什么不足之处还希望大家多多指正。 我克隆的这个片段大小是1.8kb，用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。 反应体系：5*buffer 5 ul MgCl2 5 ul dNTPs 8 ul Primer 1 1 ul Primer 2 1 ul LA-Taq 0.5 ul cDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA） ddH2O up to 50 ul

基因枪的使用注意事项

1)质粒DNA的储存浓度在枪击前最好调至1ug/ul，这样有利于制备微粒子弹时的DNA取样。质粒DNA与金粉形成复合体的比例以0．75～1Pg／mg(金粉)为宜。   2)质粒DNA的纯度和浓度是影响转化率的重要参数之一。一般每枪用0．75～l／1gDNA。 3)亚精胺最好是现用现配，或者储存于一20~C冰箱中(时间不超过1个月)。如没有保存好或保存时间过长，亚精胺会发生降解，从而影响DNA吸附于金属微粒表面的能力   4)对于植物材料转化，微粒子弹载体的选择视