人E-选择素G98T基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)

人E-选择素G98T基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)
产品名称：牛巴贝斯虫PCR试剂盒
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
产品相册

人E-选择素G98T基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)
具有下列特点：
1.根据 指标的保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分                            成分
 2×qPCR MagicMix                 500 μL（装 A 袋）
微量核酸稀释液（荧光 PCR 专用）1 mL（装 A 袋）
PCR 引物混合物                        100 μL（装 A 袋）
基因阳性对照                           50 μL（装 B 袋）
DNA 病毒裂解液（试用装）       15 次（9 mL）
使用手册                              1 份
运输及保存：低温运输、-20℃保存(A 袋试剂放样品准备区、B 袋的阳性对照分开放置)，
自备试剂DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
应用案例

样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头，在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
牛巴贝斯虫PCR试剂盒设置 qPCR 反应（20  μL 体系，在样品制备室进行）
9.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后*后加）：
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。
10. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行
优化）。
过程温度时间
预变性95℃1 分钟
PCR 反应95℃15 秒
（30 个循环）60℃15 秒
72℃15 秒
11. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时，
吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500 nm，发射光
谱在 530 nm。
四、数据处理
12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品
的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
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