GFP 稳转人间充质干细胞
1. 产品信息
产品名称 |
□GFP-hUC-MSC (脐带) □GFP-hBM-MSC (骨髓) □GFP-hAD-MSC (脂肪) |
规格 |
□1×10^6cells/管 □5×10^6cells/管 □5×10^7cells/管 □_____ |
细胞代次 |
□P3 □P4 □P5 □_____ |
保存条件 |
液氮 |
无菌检查 |
阴性 |
支原体检查 |
阴性 |
细胞活率 |
≥75% |
表面标志物检测 |
GFP+≥90% (CD73+ ,CD90+ ,CD105+)≥95% (HLA-DR+ 、CD45+ 、CD34+)≦2% |
2. 产品介绍与特性
绿色荧光蛋白(GFP)示踪技术能够直接监控生物体内细胞活动,具有表达稳定、检测方便、结果
直观等特点,已经成为细胞生物学和分子生物学的重要分子标记,在生命科学、医学研究和药物开发
等方面得到了广泛的应用。GFP 标记的脐带/骨髓/脂肪间质干细胞系列产品,将 GFP 报告基因通过慢
病毒转染稳定整合到细胞染色体内,在保持细胞的形态、增殖和分化不受影响的情况下,GFP 基因能
够稳定遗传,并且在植入体内长时间后仍能跟踪检测,使您能更直观地研究干细胞在体内的迁移、分
布、扩增和分化等生物学行为,被广泛应用于干细胞临床前研究。
3. 注意事项
在无菌条件下处理该产品;
经本公司细胞制备中心验证,保持良好的干细胞特性;
为确保培养效果,建议配套使用本公司专用的人间充质干细胞培养基、胰蛋白酶、冻存液等配套试剂;
荧光细胞株,请勿长时间强光照射,避免荧光淬灭;
该产品仅限科研使用,最佳使用代次为 P5 代,建议不超过 P8 代。
4. 产品保存
收到产品后,检查产品是否有破损及是否处于冻存状态。若处于冻存状态,立即放置于-80℃的深低温
冰箱或液氮中保存;若已解冻,请即刻拍照记录向厂家反馈情况;
收到产品后,请立即放置于-80℃的深低温冰箱或液氮中至少 3d 后再进行复苏操作,以保证产品的稳定
性和细胞活率。
5. 产品复苏
开启水浴锅预热至 37℃,干细胞专用培养基提前放置室温备用;
无菌条件下,吸取 5-10mL 干细胞专用培养基加入到离心管中备用;
从低温容器中取出冻存管,立即置于水浴中来回迅速摇晃,直至冻存液完全解冻,此过程控制在
2-3min 以内;
注意:
① 尽可能避免水没过冻存管帽,建议用镊子夹住冻存管连续晃动,以降低污染的风险
② 2-3min 内完成细胞复苏过程,时间过久会导致复苏细胞活率较差,无法贴壁
待细胞冻存液完全解冻,用 75%酒精擦拭冻存管的外壁后移入超净工作台内;
迅速将细胞悬液转移至含有专用培养基的离心管中,500g 离心 5min;
离心结束后弃上清,加入适量专用培养基重悬细胞,用移液管轻柔吹打混匀,取样计数后,
以(1.0-1.5) ×104个细胞/cm2接种至培养瓶或培养皿中;
注意:
① 由于刚复苏的细胞比较脆弱,整个操作过程保持轻柔
② 为了保证复苏培养效果,推荐使用 Corning 等国际一线品牌的培养瓶/皿
将培养瓶/皿置于平面上,轻柔上下左右十字摇晃 5 次,使细胞悬液均匀分布于培养瓶/皿中;
在培养瓶/皿上方标识好细胞信息,转移至 5%CO2、37℃、湿度为 95%的二氧化碳培养箱中培养;
注意:为了保证贴壁效果,放置培养箱后 2h 内请勿移动培养瓶/皿,24h 内尽量不要轻易移动
48h 后进行全量换液处理,当细胞汇合度达到 80-90%时,进行传代处理。