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- YBio/钰博生物
- YB721840y-14
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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大量
- 英文名：
Treponema pallidum SYBR qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Treponema pallidum SYBR qPCR Kit
产品及特点
梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)(Treponema pallidum)是引起梅毒的病原体，是一种亚种引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和先天梅毒(胎传梅毒)等。女性梅毒潜伏期症状实际上并不明显，一般梅毒螺旋体侵入人体后有2~3周的潜伏期。但是经过潜伏期后梅毒的各种症状会逐渐展现。梅毒入侵人体之后通常会有两到三周的潜伏期，临床特征主要为硬下疳，通常比较容易发生于大小阴唇、阴蒂、肛门等部位，也容易见于唇、舌、乳房等部位，因此梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2.特异性高，引物是根据人梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)高度保守区设计,不会扩增其他细菌。
3.引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规PCR高100倍。
4.提供无传染性的PCR阳性对照，便于区分假阴性样品。
5.一管式操作，荧光PCR检测，不容易产生环境污染。
本产品只能用于科研，本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×qPCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
| 试剂二 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)染料法 qPCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)染料法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 样品DNA。
使用方法 一、制备标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照（其浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
9.如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做（可以选4号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。
10.在标记管中按下表加入各成分：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | PCR阳性对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 梅毒螺旋体(苍白密螺旋体)染料法 qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | - | - |
| 自备超纯水 | - | 6 | - |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） |
- | - | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
四、荧光定量PCR反应参数
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
| PCR反应 （40个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 50℃ | 0.5 min（采集SYBR通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ |
10min
|
五、数据处理
12.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
13.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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文献和实验佚名 梅毒螺旋体(Treponema Pallidun)是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。梅毒是一种广泛流行的 性病 ，近几年在我国发病率又有所回升。 一、生物学特性 梅毒螺旋体细长，5～15×0.1～0.2um，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则，平均8～14
网络 第二 节 梅毒螺旋体 梅毒螺旋体（Treponema Pallidun）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。梅毒是一种广泛流行的 性病 ，近几年在我国发病率又有所回升。 一、生物学特性 梅毒螺旋体细长，5～15×0.1～0.2um，形似细密的弹簧，螺旋
螺旋细密，有8～14个规则的螺旋，两端尖。分致病性和非致病性两大类。对人致病的密螺旋体有苍白密螺旋体和品他螺旋体两个种。苍白螺旋体又分为3个亚种：苍白亚种、地方亚种和极细亚种，它们分别引起人类梅毒、地方性梅毒和雅司病等。 …… 点击查看：bbs.med66.com/forum-267-250/topic-1752962.html
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