- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB13-72410
- 中国
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Babesia bigemina
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Babesia bigemina
本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）技术检测，可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因，进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域，不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较，本方法更为快速，特异性更高。
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增双芽巴贝斯虫序列，与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 双芽巴贝斯虫PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 双芽巴贝斯虫PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL） | 试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是双芽巴贝斯虫PCR 阳性对照的1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 双芽巴贝斯虫PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照（水） | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照（双芽巴贝斯虫PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验则认为双芽巴倍虫在微小牛蜱中不进行有性生殖，通常只进行无性生殖。 许多种巴倍虫能引起家畜患病，如双芽巴倍虫是引起牛的红尿热病和蜱性黑热病的病原体，患病的牛表现发高热、食欲丧失、便秘、泻痢、血尿和贫血，严重的可在发病后 1个星期死亡，死亡率约达 90％。此病在世界各地都有发生，传染媒介是环节巨足方头蜱。犬巴倍虫通过红扇头蜱传染，可引起使犬致死的恶性黄疸病犬焦虫病。
玻璃器具、研钵处理方法： 洗洁精洗后自来水冲7遍，双蒸水冲3次，60℃烤干，泡酸过夜后自来水冲7遍，双蒸水冲3次。烤干，150℃烤4小时。 枪头、EP管等处理方法： 0.1%DEPC溶液浸泡过夜，取出高压灭活DEPC 15分钟。 实验用水： 均用0.02%DEPC处理水配制。0.02%DEPC处理水配制方法：配0.02%DEPC水溶液，15Psi高压15分钟。 组织处理：迅速取出称取100mg，放入1.5 ml EP管中（未处理），置-70℃保存。 提取方法： 1. 将组织
SYBRR Green PCR试剂盒得出相当好的结果。重复试验的结果非常接近，NTC根本没有出现扩增。这个试剂盒对于利用SG扩增低拷贝数的模板非常有用。3.2 双标记探针 双标记探针的优化比SG优化容易。最重要的事情，也就是需要优化的是引物/探针浓度和它们的比例。最适的MgCl2浓度通常是4-5mM （终浓度），然而商业上可买到的Master Mixes用到7.5mM （终浓度）。 荧光探针的设计直接关系到实时监测的成败。下面的规则总结了设计引物和双标记探针应该考虑的一些建议。 a） 针对双
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