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- 2025年07月13日
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大量
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CFSE Cell Division Assay Kit
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/
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详见说明
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齐源生物
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2-8℃
齐源生物提供ELISA试剂盒代测，生化试剂盒代测，木质素代测，纤维素代测服务。
齐源生物是专业生产生化试剂盒的厂家，价格优惠，现货供应。
齐源生物专业代理美国Cayman，美国Cayman公司成立于1980年6月6日，其创始人和首席执行官柯克·麦克西（Kirk Maxey）博士的目标是诞生，以证明自然增长的高粱珊瑚作为可再生的，经济上可行的前列腺素的价值。仔细的环境研究和与大开曼岛政府的谈判在1981年8月达到高潮，当时在渔人堡附近收集了八磅重的高粱Plexaura homomalla样本。珊瑚被冷冻并运到丹佛的一个小实验室，在那里有30克的前列腺素A 2被提取。受到这一成功以及向研究界提供负担得起的高质量前列腺素的愿景的鼓舞，Maxey博士的新生实验室提供了五种前列腺素标准品。1981年11月，开曼化学关闭了第一笔销售！在丹佛市发展了数年之后，总部迁至密歇根州的安阿伯市，在那里，Cayman建立了第一个完整的合成化学实验室。
齐源生物科技有限公司长期现货出售各种进口代理品牌：美国Cayman，瑞典Agrisera，美国USP、美国R&D、QIAGEN凯杰、BioVision、sigma西格玛、加拿大TRC、加拿大TLC、美国CATO、美国O2si、GIBCO、日本wako、PeproTech、默克Merck、MBL、Invitrogen、OXOID、Hyclone、CST、Bio-Rad、Bender Medsystems、美国BD、Agrisera、ABNOVA、ABI、ABCAM、Thermo、赛默飞thermofisher、BP（英国药典）、德国Dr、Anogen、EXBIO、Demmeditec、Cell Biolabs、Prolmmune、ScyTek等。
关键词：半胱氨酸白三烯Express ELISA试剂盒说明
细胞的CFSE标记
1在室温下以300 x g离心5分钟，并吸取上清液。
2用预热的无菌PBS清洗细胞，并按上述方法离心
3在预先加热的PBS中以1-2 x 10细胞/ml
4将上述制备的等体积2X CFSE染色液加入培养基中细胞悬浮液，快速彻底混合。CFSE的最终稀释度为1:400.
5在37摄氏度的水浴中培养细胞15分钟。反转管偶尔用CFSE标记细胞
6添加至少等量的含有10%FBS和在室温下以300 x g离心分离细胞5分钟。
7吸取上清液，在10-20 ml中再清洗细胞两次培养基的选择。第三次离心后，将细胞重新悬浮到培养基中化验所需浓度。注：CFSE标签可通过流式细胞仪在这个阶段，但读数在24小时内的标签应仅用于确定标记是否成功
8根据实验需要刺激细胞2-7天实验条件高度依赖于所使用的细胞和刺激物，以及所以每个实验装置都需要单独确定
9为了测定CFSE的稀释度，将细胞收获到FACS试管或培养孔中一个v型底板，在流式细胞仪上清洗并读取488nm，525nm发射。附加表面和细胞内染色可在不丢失信号的情况下进行，但适当的单次染色必须包括执行补偿的控件
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文献和实验检测细胞增殖的方法很多，MTT、CCK8、BrdU 等等，你知道细胞可以 CFSE 染色用流式来检测细胞增殖么？好啦，不知道的同学搬好小板凳排排坐啦！CFSE 是一种荧光染料，脂溶性高，易进入细胞，可以与胞内氨基酸发生不可逆的结合，在细胞的分裂过程中能够进入子代细胞，同时荧光强度也变为母细胞的一半，可用流式或荧光显微镜对其进行分析。下面我们就开始动手，用流式来检测脾淋巴细胞的增殖。☟☟☟— 先准备一些试剂 —ConA 储存液：用双蒸水配置终浓度为 1 mg/ml（200×）CFSE 储存
；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞
【求助】求助：GFP或者萤光素酶稳定表达的U87或者C6细胞
了一下其基本原理如下：CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中，它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。另外，CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。荧光探针CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光染色最强
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