
均一化cDNA文库构建
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- 2025年07月08日
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上海泉脉
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001
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上海泉脉生物科技有限公司
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我们基于双链特异性核酸酶(Duplex-Specific Nuclease, DSN)的先进cDNA文库均一化技术,能减低高丰度表达基因100倍以上,有效富集低丰度表达基因,从而降低冗余率。
文库特点:
1、样品用量少,只需1mg总RNA;
2、无需反复杂交过程,均一化程度高;
3、均一化后平均插入片断大小无明显变化;
4、均一化后,减低高丰度表达基因10-100倍。
材料要求:组织(100~200mg)、细胞(>106)或总RNA (>1mg ),采用新鲜样本,RNA 无任何降解。
服务周期:得到合格的总RNA后30个工作日。
上海泉脉生物科技有限公司是一家专注于生命科学领域服务的高科技公司,主要从事于分子学水平的各项研究。依托Illumina、Agilent、Roche以及Qiagen公司的技术平台,以基因芯片、二代全基因组测序及生物信息学分析服务为主,涵盖了基因组学、转录组学、表观基因组学等多个研究领域,服务于广大科研工作者
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文献和实验,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。 cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。 原理 经典cDNA文库构建的基本原理:用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA 加上适当的连接
文库具有以下4方面的优点:第一,在经济上具有广泛的应用空间,可以节约大量试验成本。第二,增加克隆低丰度 mRNA 的机会,适用于分析各种发育阶段或各种组织的基因表达及突变检测。第三,与原始丰度的 mRNA 拷贝数相对应的 cDNA 探针与均一化的 cDNA 文库作杂交,可以估计出大多数基因的表达水平及发现一些组织特异的基因。而以往的文库构建,忽略了 mRNA 丰度的影响。第四,可以用于遗传图谱的制作和进行大规模的原位杂交,作为优化的文库系统还可以用于大规模的测序。 现在,在构建均一化
by annealing the mRNA to oligo-dT loaded magnetic beads which will greatly facilitate the subsequent recovery of the cDNA products. In either case the next step is a reverse transcriptase treatment which gives rise to a socalled DNA/RNA hybrid. 5. Oligo dG
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